维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法

实验目的

1.  学习定量维生素C的原理和方法

2.  掌握微量滴定技术

实验原理

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。

维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。

维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。

其化学反应式如下：

仪器、试剂

（一）仪器：研钵、天平、烧杯（50ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗

（二）材料、试剂

1、新鲜蔬菜或新鲜桔子

2、1%草酸溶液

1g草酸溶于100ml蒸馏水中

3、2%草酸溶液

2g草酸溶于100ml蒸馏水中

4、标准维生素C溶液

准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。在使用前临时配制。

5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液

  溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素C标准液标定其浓度。

实验步骤

一、2，6—二氯酚靛酚溶液的标定：

取3ml维生素C标准液及3ml1%草酸溶液于50ml的锥形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.06mg维生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。

二、样品制备：

1、称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约5克，于研钵中，加入等体积(5ml)的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。

2、将匀浆液移入50ml锥形瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，并稀释至50ml刻度处。

3、充分摇匀，静止几分钟后过滤至50ml烧杯内。（注：50ml匀浆液要过滤完全）。

三、样品滴定：

用移液管吸取滤液3-8ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色15s不褪色为止。记录所用染料的ml数。为避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min。（注：滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释）

四、计算：维生素C含量（mg/100g样品）c=（VT/W）×100

V为滴定样品所耗用的染料的ml数

T为1ml染料相当于维生素C的mg数

W为滴定时所用样品的g数

注意事项

1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素C被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释；

2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢；

3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与2，6—二氯酚靛酚反应，但反应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点；

4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液等，本实验用30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。

5.在生物组织和组织提取液中，维生素C还能以脱氢维生素C及结合维生素C的形式存在，它们同样具有维生素C的生理作用，但不能将2，6—二氯酚靛酚还原脱色.

6. 2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而1%的草酸无此作用