葡萄糖胰蛋白胨琼脂的应用

背景^[1-3]

葡萄糖胰蛋白胨琼脂用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)。

葡萄糖胰蛋白胨琼脂

葡萄糖胰蛋白胨琼脂检验原理:

胰酪蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖为可发酵的糖,溴甲酚紫是酸碱指示剂;琼脂为凝固剂。

葡萄糖胰蛋白胨琼脂用法:

称取本品30.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。

葡萄糖胰蛋白胨琼脂成分(g/L)：

胰酪蛋白胨：10.0；葡萄糖：5.0；琼脂：15.0；溴甲酚紫：0.04；pH值6.7±0.1；25℃。

食品经过加热处理后一般残留的细菌为嗜热菌及其芽孢。嗜热脂肪芽孢杆菌是一种兼性厌氧菌，嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢是耐热性最强的芽孢之一，通常作为验证湿热灭菌程序的生物指示剂，同时也是造成罐头食品腐败变质的主要微生物之一。芽孢的耐热性除了与芽孢种类有关，还与所处的环境如酸碱度，水分活度，无机盐浓度等有着紧密的关系。

嗜热微生物是指最适宜生长温度在45℃以上的微生物。嗜热微生物不仅能耐受高温，而且能在高温下生长繁殖，其生存环境需要较高的温度。这与普通芽孢细菌的耐热性不同，普通芽孢细菌在高温下形成芽孢抵抗逆境，待环境条件恢复，芽孢萌发成营养体，而芽孢不具有繁殖能力，只是抗逆性休眠体。

应用^[4][5]

葡萄糖胰蛋白胨琼脂可以用于鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的种类鉴定及其生物学特性研究

分离鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌并鉴定其种类,验证其重寄生性,测定其寄主范围,优化其人工培养条件,测定其重寄生率,为鸡蛋花锈病及其他作物锈病的生物防治提供理论依据。

研究结果如下:1.鉴定出鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌为Simplicillium subtropicum。经分离和单孢纯化后,结合鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的形态特征和ITS、SSU和LSU的3个片段的核酸序列分析,将鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌鉴定为S.subtropicum。这是首次报道S.subtropicum为鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌。

2. 用S.subtropicum接种11种植物锈病菌,发现仅3种锈病菌被重寄生。用S.subtropicum接种香茶菜鞘锈菌、鸡矢藤鞘锈菌、落叶松杨栅锈菌、多堆柄锈菌、屈恩柄锈菌、美人蕉柄锈菌、两栖蓼柄锈菌、葡萄层锈菌、刺李疣双胞锈菌、无花果蜡锈菌和略小柄锈菌共11种植物锈病菌,发现仅香茶菜鞘锈菌、鸡矢藤鞘锈菌和落叶松杨栅锈菌被重寄生。这是首次发现S.subtropicum是该3种植物锈病菌的重寄生真菌。

3. 明确了S.subtropicum在琼脂培养基平板上,菌落直径的基本条件。在供试的10种培养基上,S.subtropicum在发酵专用燕麦粉琼脂培养基上28℃培养7 d的菌落直径。以察氏培养基为基础培养基,28℃培养7 d,发现菌落直径的碳氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,其最适培养条件为:培养基p H为6和温度为28℃;黑暗培养会促进菌落生长。

4. 明确了S.subtropicum的液体及固态培养的产孢量基本条件。在供试的20种液体培养基中,S.subtropicum在2%米皮糠液体培养基中产孢量。以察氏液体培养基为基础培养基,发现当碳源为可溶性淀粉、氮源为牛肉膏、蛋白胨或胰蛋白胨时,S.subtropicum的产孢量;其中,产孢量的可溶性淀粉和牛肉膏的比例为20:9。在米皮糠液体培养基中,最适产孢的基本条件分别为分生孢子液浓度为1×108个/m L的初接种量为8 m L、震荡培养器转速为200 r/min、培养时间为7 d和液体p H 7。在供试的10种固态培养基中,S.subtropicum在玉米粉麦麸培养基中产孢量;其中,产孢量的料水比为1:1.2。产孢量的补充碳源为可溶性淀粉,氮源可选择胰蛋白胨、牛肉膏或蛋白胨。

5.用液体培养的S.subtropicum分生孢子液分别在室内及田间喷洒鸡蛋花锈病叶背的夏孢子堆,喷洒后7 d观察和统计其对鸡蛋花鞘锈菌的重寄生率。在室内离体条件下,分生孢子液浓度为1.0×106个/m L、自米皮糠液体培养基上产生的分子孢子对鸡蛋花鞘锈菌的重寄生率最高,为86.00%。在田间条件下,在米皮糠培养基中的S.subtropicum分生孢子液对鸡蛋花鞘锈菌的重寄生率为64.23%。

参考文献

[1]Hyperparasitism by Sphaerellopsis macroconidialis may lower over‐wintering survival of Uromycladium acaciae[J].Fraser Stuart;McTaggart Alistair R.;Roux Jolanda;Wingfield Mike J..Forest Pathology,2021(3)

[2]Elucidating the interactions between the rust Hemileia vastatrix and a Calonectria mycoparasite and the coffee plant[J].Salcedo-Sarmiento Sara;Aucique-Pérez Carlos E.;Silveira Patrícia R.;Colmán Adans A.;Silva AndréL.;Corrêa Mansur Paloma S.;Rodrigues Fabrícioá.;Evans Harry C.;Barreto Robert W..iScience,2021(4)

[3]Plumeria rubra L.–A review on its ethnopharmacological,morphological,phytochemical,pharmacological and toxicological studies[J].Tanay Bihani.Journal of Ethnopharmacology,2021

[4]A fungus-eat-fungus world:Digitopodium,with particular reference to mycoparasites of the coffee leaf rust,Hemileia vastatrix[J].Colmán Adans A.;Evans Harry C.;Salcedo Sarmiento Sara S.;Braun Uwe;Belachew Bekele Kifle;Barreto Robert W..IMA Fungus,2021(1)

[5]黄奕蔓.鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的种类鉴定及其生物学特性研究[D].广西大学,2022.