BPC 157的作用与制备

BPC-157 促进肌肉和韧带的再生，促进创面愈合，提高肌腱的硬度与弹性，改善促进胃部血液循环。研究表明，bpc-157在人体器官中有多种保护作用，如胰腺、肝损伤、内皮、心脏损伤和关节，使其成为一种多功能肽，能够给人类带来巨大的益处。胃部血液循环得到改善提高，对于健美运动员增肌的意义。

作用

BPC 157(body protection compound)为胃液肽(gastric juice peptide)的片段，由15个氨基酸组成，分子量1419。氨基酸序列为Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys-Pro-Ala-Asp-Asp-Ala-Gly-Leu-Val(甘-谷-脯-脯-脯-甘-赖-脯-丙-天冬-天冬-丙-甘-亮-缬)。BPC 157具有细胞保护、抗溃疡和抗炎作用，其作用和细胞保护、NO系统、细胞迁移有关。

制备方法

制备BPC157肽的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制备Fmoe-Val-WangResin

称取王氏树脂1g；Loading：1.0mmol／g，倒入反应柱中，加入10mlDMF，常温浸泡30分钟后用真空泵抽干，加入Fmoc-Val-OH 3.4g，DIC0.7ml，DMAP0.1g，DMF10ml，于常温反应2小时，再加入封闭试剂苯甲酰氯0.6ml, 吡啶0.4ml, DCM10ml常温反应0.5小时，树脂用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Val-WangResin；   

(2)制备Fmoc-Leu-Val-WangResin

在步骤(1)的Fmoe-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Leu-OH 0.7g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Leu-Val-WangResin；

(3)制备Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(2)的Fmoc-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc- Gly-OH0.7g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin；

(4)制备Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(3)的Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Ala-OH0.7g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(5)制备Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(4)的Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc- Asp(otBu)-OH1.2g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(6)制备Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(5)的Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Asp(otBu)-OH1.1g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(7)制备Fmoc- Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(6)的Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Ala-OH0.7g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(8)制备Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(7)的Fmoc-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Pro-OH0.8g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(9)制备Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(8)的Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc- Lys(Boc)-OH1.1g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(10)制备Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(9)的Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Gly-OH0.7g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(11)制备Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(10)的Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Pro-OH0.8g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(12)制备Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(11)的Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Pro-OH0.8g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(13)制备Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(12)的Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc-Pro-OH0.8g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(14)制备Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(13)的Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc- Glu(otBu)-OH1.1g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(15)制备Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(14)的Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，加入Fmoc- Gly -OH0.8g，DIEA0.4ml，TBTU0.56g，HOBT0.2g，DMF10ml常温反应1.5小时，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(16) 制备Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(15)的Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中，加入脱帽试剂，即20%哌啶的DMF溶液，常温反应5分钟，抽干，重新加入脱帽剂常温反应20分钟，用DMF洗涤3次，异丙醇洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，甲醇洗涤2次，用甲醇浸泡1小时，抽干，用氮气吹干树脂成干燥的颗粒，所得到的树脂为：Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin；

(17)制备粗品

把吹干的Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin倒入玻璃的切割瓶中，加入预冷的切肽试剂，即TFA9.5ml，H2O0. 5ml，常温反应1.5小时，过滤除去树脂，加冰乙醚500ml沉淀，3500转3分钟离心收集沉淀物，用乙醚洗涤3次，用纯水溶解后，低温冷冻干燥24小时，获得BPC157肽粗品；

(18)纯化

将步骤（17）的BPC157肽粗品1.23g溶于13ml水中，过滤，滤液上样于C18色谱柱，即 Kromasil-C18，20mm *250mm，流动相为如下A、B液体的混合物：A：0.1%三氟乙酸加99.9%水；B：0.1%三氟乙酸加99.9%乙腈；从A液体占混合物比例100%开始梯度洗脱，期间B液体占混合物比例逐渐升高，直至占100%，流速为10ml／min，检测波长为： 215nm；用相同条件下以实验室级别生产的少量纯品做对照指示目标峰，收集目标峰的流出液，浓缩冻干，获得BPC157。