人恶性胶质瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人恶性胶质瘤细胞是由Ponten·J等建立，源于恶性神经胶质瘤；人恶性胶质瘤细胞呈上皮细胞样，贴壁生长，密度高时可漂浮或堆积成簇，裸鼠皮下接种可成瘤，同时也是合适的转染宿主。该细胞STR鉴定结果无误，且支原体检测阴性。人恶性胶质母细胞瘤细胞，是通过移植技术从一个男性患者的恶性胶质瘤组织中提取出来的细胞系，常用于神经学和肿瘤免疫学研究，如药物对胶质母细胞瘤的影响、GBM（胶质母细胞瘤）的体外模型建立。

人恶性胶质瘤细胞

人恶性胶质瘤细胞培养步骤：

1）复苏人恶性胶质瘤细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有人恶性胶质瘤细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）人恶性胶质瘤细胞传代：如果人恶性胶质瘤细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁人恶性胶质瘤细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若人恶性胶质瘤细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，人恶性胶质瘤细胞脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）人恶性胶质瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

应用^[4][5]

人恶性胶质瘤细胞可以用于细胞粘附分子Ninjurin-2于U87-MG等人恶性胶质瘤细胞系中的作用及初步机理探讨

以U87-MG等人恶性胶质瘤细胞作为该类病症的细胞模型进行研究,发现一种新的细胞膜上粘附小分子蛋白Ninjurin-2会对该细胞模型起特别的影响。Ninjurin-2作为一种细胞膜上粘附分子在功能与机理上却鲜有报道,该家族其他分子如Ninjurin-1及NinjurinA的研究则相对较多,但均未与肿瘤相关,而我们课题组涉猎其中,研究Ninjurin-2与恶性胶质瘤之间的关系。

在Oncomine数据库中发现,在中枢神经系统的胶质瘤中,NINJ2基因的水平较低,这揭示了NINJ2可能对于该类肿瘤有抑制作用。后续在U87-MG等人恶性胶质瘤细胞中过表达NINJ2后观察细胞性状,通过CCK-8及流式检测,我们确定了在U87-MG等人恶性胶质瘤细胞内高量表达Ninjurin-2,会诱导该细胞产生早期凋亡,并减少该细胞的活率。

同时,也一并分析了NINJ2对于该细胞其他性状的影响,发现NINJ2并不影响细胞迁移及细胞周期分布。之后,运用两种肿瘤外植体实验来观察Ninjurin-2对于U87-MG细胞于体内的成瘤的影响,与体外细胞实验结论相符,Ninjurin-2会降低该细胞于体内的成瘤能力。

对于这些表型进行了初步的机理探讨,认为Ninjurin-2可能会引起细胞应激,并可能通过ER stress及mTOR等关于蛋白合成与代谢相关信号通路来进行调控,从而引起细胞早期凋亡,但该分析还需要更多的实验证据来支持。Ninjurin-2蛋白对于U87-MG等人恶性胶质瘤细胞的生长及成瘤的抑制作用,提示了其机理用于GBM病症治疗的可能性,希望随着后续关于Ninjurin-2对于GBM作用研究的进行,能为改善、缓解甚至治愈GBM提供更多有价值的参考。

参考文献

[1]Glutamate as chemotactic fuel for diffuse glioma cells:Are they glutamate suckers?[J].Sanne A.M.van Lith;;Anna C.Navis;;Kiek Verrijp;;Simone P.Niclou;;Rolf Bjerkvig;;Pieter Wesseling;;Bastiaan Tops;;Remco Molenaar;;Cornelis J.F.van Noorden;;William P.J.Leenders.BBA-Reviews on Cancer,2014(1)

[2]The driver and passenger effects of isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations in oncogenesis and survival prolongation[J].Remco J.Molenaar;;Tomas Radivoyevitch;;Jaroslaw P.Maciejewski;;Cornelis J.F.van Noorden;;Fonnet E.Bleeker.BBA-Reviews on Cancer,2014

[3]Treatment of newly diagnosed malignant glioma in the elderly people:new trials that impact therapy[J].M.C.Chamberlain.Int J Clin Pract,2013(12)

[4]Genetics of adult glioma[J].McKinsey L.Goodenberger;;Robert B.Jenkins.Cancer Genetics,2012

[5]林力.细胞粘附分子Ninjurin-2于U87-MG等人恶性胶质瘤细胞系中的作用及初步机理探讨[D].厦门大学,2017.