人慢性骨髓单核细胞性白血病的应用

背景^[1-3]

人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞由Rovera课题组建立，来源于一名患有人双表型髓性单核细胞白血病(biphenotypic B myelomonocytic leukemia)的10岁男孩的外周血。Interleukin(IL)-3可以独立地支持该细胞长期生长，使用10%FBS培养时则不需要额外添加IL-3。但是，在IL-3和生长因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor(GM-CSF)均处于低浓度的情况下，IL-3会抑制MV-4-11细胞的增殖。生长因子Granulocyte Colony Stimulating Factor(G-CSF)会协同GM-CSF促进MV-4-11细胞的增殖，而单独的G-CSF会短暂刺激该细胞系。

人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞

据文献[PubMed:3500218]报道，间接免疫荧光法检测髓性单核细胞抗原CD15，超过96%的该细胞为阳性，40～96%为单核细胞抗原CD4阳性，4-11%为单核细胞抗原CD10阳性。每个批次均通过本库支原体检测，结果为阴性。每个批次均通过本库支原体检测，结果为阴性。

人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、人慢性骨髓单核细胞性白血病    细胞复苏

1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2）人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞传代

1）待人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞冻存

1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。

应用^[4][5]

人慢性骨髓单核细胞性白血病细胞可以用于苯并呋喃并[3,2-c]喹啉类化合物合成及其抑制MV-4-11活性研究

多并杂环是临床药物和有机材料中的常见骨架结构。苯并呋喃并[3,2-c]喹啉衍生物光电材料得到了广泛研究,而作为生物活性化合物却鲜见报道。

围绕苯并呋喃并[3,2-c]喹啉骨架的构建及其衍生物的抗肿瘤活性开展探索性研究,取得如下结果:

部分:苯并呋喃并[3,2-c]喹啉类化合物骨架构建方法研究基于课题组的前期研究,本论文发展了一种构建苯并呋喃并[3,2-c]喹啉骨架的新方法,即以3-(2-甲氧基苯基)喹啉-4(1H)-酮作为起始原料,通过原位氯代-脱甲基化反应“一锅法”生成关键中间体2-(4-氯喹啉-3-基)苯酚,然后经碱催化的分子内环化获得目标产物。两步反应收率分别可达96%和88%。官能团耐受性实验发现,无论是苯并呋喃还是喹啉结构单元,吸电子取代(卤素)和给电子取代(甲基和三氟甲氧基)的底物均能获得较高的总收率,体现了新方法良好的底物普适性。与已见报道的合成方法相比,新方法反应温和,且避免了金属催化剂和危险试剂的使用,丰富了苯并呋喃并[3,2-c]喹啉类化合物的合成方法。

第二部分:苯并呋喃并[3,2-c]喹啉类化合物的生物活性初探及其衍生化对所合成的化合物进行了初步的抗肿瘤活性探索,测试了19个苯并呋喃并[3,2-c]喹啉类化合物对RPMI 8226(多发性骨髓瘤细胞株)、SUM 149(乳腺癌细胞株)、T47D(乳腺导管癌细胞株)和MV-4-11细胞株(急性髓细胞白血病细胞株)的抑制作用。

结果显示,该类化合物对MV-4-11细胞株显示了较好的抑制活性。其中化合物5活性,IC50值为0.12±0.044μM,同时对人外周血单核细胞(PBMC)显示了较好的选择性(SI=79.5),提示该化合物具有相对较弱的毒性。进而我们对上述苯并呋喃并[3,2-c]喹啉化合物进行了衍生化,设计、合成并表征了17个新化合物,测试了其对MV-4-11细胞株的抑制活性,结果显示,9-位的结构改造,包括羟基甲醚化、引入二胺取代基对提高抑制活性有利。

该结果进一步明确了构-效关系,同时为该类结构化合物在抗急性髓细胞白血病药物先导物发现中的潜在应用积累了一定的研究基础。

参考文献

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