人甲状腺癌乳头状细胞的应用

背景^[1-3]

人甲状腺癌乳头状细胞分离自人甲状腺癌的乳头状亚型。

人甲状腺癌乳头状细胞

人甲状腺癌乳头状细胞组织结构特点：

1.肿瘤性乳头：具有复杂的、分支状、排列方向无序的乳头。乳头有纤维血管轴心（有时仅为纤维性）。被覆单层或复层，有密集卵圆细胞核的细胞。

滤泡亚型：主要或完全由滤泡组成的乳头状癌。诊断主要根据出现乳头状癌典型核的特征。支持该诊断的特征包括浸润性生长方式，纤维性小梁形成（尤其是在肿瘤的周围），砂粒体，具有扇贝状边缘的强嗜酸性类胶质及出现顿挫型乳头。

人甲状腺癌乳头状细胞细胞核的特点：

1.毛玻璃样细胞核：核常较大并有重叠。（该特点在冰冻或细胞学涂片不明显，用高浓度福尔马林固定的组织中更显著。）毛玻璃样核形成机理不清楚。有80%多的病例可以见到。

2.核内假包涵体：实际上是胞浆内陷，表现为轮廓清晰的嗜酸性结构。有80-85%的病例可以见到。

核沟：易出现在圆形或梭形细胞核中，常沿核的长轴走行。核沟是冗赘的核膜内折的形态学表现。但该特点亦可见于甲状腺其它病变，包括乔本氏病，腺瘤样增生和弥漫性增生以及滤泡性腺瘤（尤其是玻璃样梁状腺瘤）。

人甲状腺癌乳头状细胞细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

人甲状腺癌乳头状细胞可以用于小檗碱在甲状腺乳头状癌中的作用及机制

观察可疑恶性甲状腺结节的中医药治疗临床转归。

方法:回顾性分析于可疑恶性甲状腺结节患者的临床资料:中老年女性患者因甲状腺结节进行性增大就诊,甲状腺彩超提示甲状腺恶性病变可能,患者拒绝手术,予以口服中药小檗碱随访观察6个月后复诊,比较小檗碱治疗前后的甲状腺功能及甲状腺结节变化情况,并结合相关文献进行分析讨论。结果:患者甲状腺功能无明显变化,甲状腺结节未再增大,复查甲状腺彩超示TI-RADS分级由4b类转为4a类。

结论:小檗碱可能具有抑制甲状腺结节的作用。

小檗碱通过抑制Nrf2信号通路诱导人甲状腺乳头状癌细胞凋亡目的:研究小檗碱(Berberine,BBR)通过抑制核转录因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)相关信号通路对人甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid cancer,PTC)K1细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:根据不同处理因素将K1细胞分为10组:(1)0umol/L小檗碱组(NC组)、(2)40umol/L小檗碱组(BBR组)、(3)Nrf2过表达组(Nrf2-OE组)、(4)Nrf2过表达+40umol/L小檗碱组(Nrf2-OE+BBR组)、(5)Nrf2小干扰组(Nrf2-si RNA组)、(6)Nrf2小干扰+40umol/L小檗碱组(Nrf2-si RNA+BBR组)、(7)PI3K激动剂组(IGF-1组)、(8)PI3K激动剂+40umol/L小檗碱组(IGF-1+BBR组)、(9)PI3K抑制剂组(LY294002组)、(10)PI3K抑制剂+40umol/L小檗碱组(LY294002+BBR组),K1细胞按照上述分组处理后分别用以下方法检测相关指标:Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量,化学发光法检测过氧化物歧化酶(SOD)活性、荧光法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,RT-PCR检测Nrf2 m RNA表达,荧光显微镜观察Nrf2的核转位。

结果:与NC组比较,BBR组K1细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、促凋亡蛋白Caspase-3表达水平及ROS含量显著提高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平及SOD、GSH-Px含量显著降低(均p<0.05),与Nrf2-si RNA组、Nrf2-si RNA+BBR组作用一致(均p<0.05),而与Nrf2-OE组作用则相反(均p<0.05);与NC组比较,Nrf2-OE+BBR组细胞早期凋亡率、ROS水平显著提高,GSH-Px及Bcl-2水平显著降低(均p<0.05),细胞晚期凋亡率、SOD及Caspase-3水平均无明显改变(均p>0.05)。与NC组比较,BBR组HO-1、NQO1蛋白水平显著降低(均p<0.05),BBR组与Nrf2-si RNA组相比无统计学差异(均p>0.05)。

与NC组比较,BBR组PI3K、Akt蛋白表达水平无明显改变(均p>0.05),p-PI3K、p-Akt水平显著降低(均p<0.05)。与NC组比较,BBR组核Nrf2蛋白水平及Nrf2核浆蛋白比值显著降低,浆Nrf2蛋白水平显著提高,Nrf2m RNA表达及Nrf2核转位均被显著抑制(均p<0.05),与LY294002组、LY294002+BBR组作用一致(均p<0.05),而与IGF-1组作用则相反(均p<0.05);与NC组比较,IGF-1+BBR组核Nrf2蛋白表达水平及Nrf2核浆蛋白比值显著提高(均p<0.05),浆Nrf2蛋白水平、Nrf2m RNA表达及Nrf2核转位均无明显改变(均p>0.05)。

参考文献

[1]A national database analysis for factors associated with thyroid cancer occurrence.[J]..Scientific reports,2020(1)

[2]Berberine represses human gastric cancer cell growth in vitro and in vivo by inducing cytostatic autophagy via inhibition of MAPK/mTOR/p70S6K and Akt signaling pathways[J].Qiang Zhang;;Xiaobing Wang;;Shijie Cao;;Yujie Sun;;Xinya He;;Benke Jiang;;Yaqin Yu;;Jingshi Duan;;Feng Qiu;;Ning Kang.Biomedicine&Pharmacotherapy,2020(C)

[3]New Development of Novel Berberine Derivatives against Bacteria.[J].Jamshaid Faisal;;Dai Jun;;Yang Li Xi.Mini reviews in medicinal chemistry,2020(8)

[4]Berberine suppresses colon cancer cell proliferation by inhibiting the SCAP/SREBP-1 signaling pathway-mediated lipogenesis[J].Yunxin Liu;;Weiwei Hua;;Yao Li;;Xirui Xian;;Zheng Zhao;;Chao Liu;;Jianjun Zou;;Jun Li;;Xianjun Fang;;Yubing Zhu.Biochemical Pharmacology,2020(C)

[5]朱梓依.小檗碱在甲状腺乳头状癌中的作用及机制[D].湖北中医药大学,2021.