人组织细胞淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人组织细胞淋巴瘤细胞是于1974年从一名37岁的患有恶性组织细胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分离建立的。1979年来的研究显示该细胞在人混合淋巴细胞培养物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和维A酸的诱导下可以向终末单核细胞分化。该细胞不合成免疫球蛋白，EBV阴性；可产生溶菌酶、β-2-微球蛋白，受PMA刺激后可产生TNF-α；表达C3R；可作转染宿主；表达Fas，对TNF和抗Fas的抗体敏感。

人组织细胞淋巴瘤细胞

人组织细胞淋巴瘤细胞培养操作规程

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，补加培养基至6ml，放入培养箱继续培养。次传代推荐传代密度为1:2。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1，细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

2，4min，1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转氮入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

人组织细胞淋巴瘤细胞可以用于单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）体外趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的实验研究

模拟肿瘤微环境,检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在体外对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的趋化作用；2.为研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在胶质瘤微环境中趋化肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中的作用提供实验依据。

[方法]1.人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)复苏、原代培养及传代培养；

2. 单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)加入[ranswell小室下室,人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)接种到Transwell小室上室,进行体外趋化实验；

3. 碳酸聚酯膜冲洗、固定、HE染色,镜下阅片观察趋化人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)数量；

4. 血球计数板计数趋化细胞离心浓缩液中人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)数量,检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)趋化人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的能力；

5. 实验数据应用SPSS17.0统计软件进行分析.实验数据以均数±标准差(x±S)表示,统计学检验方法为单因素方差分析(one-way AVONA),P<0.05差异有统计学意义。

[结果]1.单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的趋化作用高于空白对照组,有显著性差异,差异有统计学意义(P<0.05)；2.单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的趋化能力和浓度相关,随着浓度增加,对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的趋化作用越明显(P<0.05)。

[结论]单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)具有趋化作用,不同浓度单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)趋化活性存在差异,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度越大,对人组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的促迁移作用越明显。

参考文献

[1]Jekyll and Hyde:the role of the microenvironment on the progression of cancer[J].MichaelAllen;JLouise Jones.J.Pathol.,2010(2)

[2]Regulation of Tumor Progression by Extracellular Galectin-3[J].Pratima Nangia-Makker;;Vitaly Balan;;Avraham Raz.Cancer Microenvironment,2008(1)

[3]Chemokine Networks and Breast Cancer Metastasis[J].Lalage Wakefield;Kent Hunter.Breast Disease,2006

[4]CCL2(Monocyte Chemoattractant Protein-1)in cancer bone metastases[J].Matt J.Craig;Robert D.Loberg.Cancer and Metastasis Reviews,2006(4)

[5]于谦.单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）体外趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的实验研究[D].昆明医科大学,2016.