马齿苋蛋白肽的应用

背景^[1-3]

马齿苋蛋白肽是分离自马齿苋的高纯度小分子多肽，主要用于食品、日化及保健品。

马齿苋蛋白肽

马齿苋为石竹目、马齿苋科一年生草本，全株无毛。茎平卧，伏地铺散，枝淡绿色或带暗红色。叶互生，叶片扁平，肥厚，似马齿状，上面暗绿色，下面淡绿色或带暗红色；叶柄粗短。花无梗，午时盛开；苞片叶状；萼片绿色，盔形；花瓣黄色，倒卵形；雄蕊花药黄色；子房无毛。蒴果卵球形；种子细小，偏斜球形，黑褐色，有光泽。花期5-8月，果期6-9月。

马齿苋含有丰富的二羟乙胺、苹果酸、葡萄糖、钙、磷、铁以及维生素E、胡萝卜素、维生素B、维生素C等营养物质。马齿苋在营养上有一个突出的特点，它的ω—3脂肪酸含量高于任何植物。ω—3脂肪酸能抑制人体对胆固酸的吸收，降低血液胆固醇浓度，改善血管壁弹性，对防治心血管疾病很有利。

马齿苋多肽提取物及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)取干燥后的马齿苋药材，粉碎成粗粉，加入石油醚回流提取，过滤，溶剂挥干；

(2) 加入水，加入中性蛋白酶，温浸提取，用碱溶液调节pH至9～10，再向其中添加碱性蛋白酶，温浸提取，煮沸灭酶，滤布过滤，减压浓缩，离心保留上清液；

(3) 将上清液过D101大孔树脂，收集下柱液，用水洗柱，收集水洗液，合并下柱液与水洗液，减压浓缩；

(4) 加入乙醇，静置后抽滤，减压补水浓缩至无醇；

(5) 使用截留分子量为2kDa的透析袋，室温下透析，减压浓缩后真空干燥粉碎即得马齿苋多肽提取物。

应用^[4][5]

马齿苋蛋白肽可以用于含马齿苋、青刺果油、透明质酸复合剂对特应性皮炎作用的实验和临床研究

(1) 明确含有马齿苋、青刺果油及透明质酸的复合剂治疗BALB/c小鼠AD模型的疗效；(2)探讨透明质酸修护生物膜在干燥性湿疹序贯疗法中的疗效。

方法：(1)动物实验：以二硝基录苯(DNCB)和4-乙氧基亚甲基-2-苯基恶唑啉(OX)分别溶于丙酮配制成1%的抗原溶液经皮诱导BALB/c小鼠耳朵建立AD模型。将小鼠分为A正常组、B丙酮组、C造模组、D基质组、E基质+透明质酸、F基质+透明质酸+马齿苋组、G基质+透明质酸+青刺果油组、H基质+透明质酸+马齿苋+青刺果油组。D、E、F、G及H组在模型建立2周后开始治疗,连续治疗4周,分别于治疗前、治疗1周、2周、3周、4周后每组处死小鼠各3只,观察治疗前后皮损变化情况、鼠耳肿胀度、血清IgE、皮损组织病理、基因蛋白芯片技术检测炎症因子IL-4、IL-5、IL-13及IL-12、IFN-r的变化、电镜观察板层小体数量变化,并行免疫组化观察CK6、CK10、CK14、Filaggrin、Loricrin表达的变化、采用德国CK皮肤弹性测试仪进行皮损无创性皮肤生理功能测试。

(2) 临床实验：多中心、随机、开放对照序贯疗法研究透明质酸修护生物膜在干燥性湿疹中的的疗效。82例分为试验组和对照组。试验组外搽糠酸莫米松乳膏和透明质酸修护生物膜,对照组仅外搽糠酸莫米松乳膏,每天2次,14d后停用糠酸莫米松乳膏,试验组继续外搽透明质酸修护生物膜,分别于首诊、治疗第7d、14d、28d、42d、56d随访。比较两组皮损SCORAD评分、总改善率、受试者自评、复发率、经皮水分丢失(TEWL)值及角质层含水量。

结果：(1)动物实验：通过鼠耳皮损变化、肿胀度、皮损组织病理学检查,血清IgE检测及炎性因子表达提示模型建立成功。治疗组较模型组皮损红斑明显变淡,无鳞屑及结痂；E、F、G、H治疗组鼠耳肿胀度较模型组明显变薄,H组降低明显(P<0.05)；H组IgE浓度较模型组明显较低(P<0.01)；蛋白芯片技术检测结果示E、F、G、H组细胞炎症因子IL-4、IL-5、IL-13浓度降低(P<0.05),IL-12、IFN-r表达升高,H组明显；电镜观察示H治疗组小鼠表皮颗粒层板层小体数目较模型组增加,但较正常对照组仍略减少；免疫组化染色结果显示H治疗组较模型组,CK10表达增强；而CK6、K14表达降低；Fliaggrin、Loricrin表达增强,尤以H组明显；无创性皮肤生理功能测试结果示：治疗E、F、G、H组角质层含水量比模型组明显升高,尤以H组升高明显(P<0.05),E、F、G、H组TEWL值较模型组明显降低,H组降低明显,接近于正常对照组(P<0.05)。

(3) 临床实验：(1)试验组比对照组皮损SCORAD评分显著改善,观察到42d时SCORAD评分,试验组(4.42±2.64)、对照组(6.03±4.02),56天时试验组(3.49±2.78),对照组(6.06±4.28),两组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)；

(2) 试验组改善率高于对照组,停用糠酸莫米松乳膏后,试验观察56d时,差异均有统计学意义(P<0.05)；

(3) 停用糠酸莫米松乳膏后,观察到28、42、56d时试验组均无复发,对照组复发率分别为11.4%、11.4%、20%,两组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)：

(4)试验组TEWL下降低于对照组,56d时,试验组TEWL(10.35±2.02)与对照组TEWL(17.28±4.06)比较,差异有统计学意义(P<0.05)；试验组角质层含水量高于对照组,42d时试验组角质层含水量(29.10±5.39)、对照组(23.12±4.76),56d时,试验组角质层含水量(31.79±4.09)、对照组(22.87±4.85),两组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。试验组未发生不良反应。

参考文献

[1]The T h2 cytokine,interleukin‐4,abrogates the cohesion of normal stratum corneum in mice:implications for pathogenesis of atopic dermatitis[J].Yutaka Hatano;;Yasuko Adachi;;Peter M.Elias;;Debra Crumrine;;Takashi Sakai;;Rieko Kurahashi;;Kazumoto Katagiri;;Sakuhei Fujiwara.Exp Dermatol,2012(1)

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[5]刘付华.含马齿苋、青刺果油、透明质酸复合剂对特应性皮炎作用的实验和临床研究[D].昆明医科大学,2013.