糜胰蛋白酶简介

糜胰蛋白酶背景^[1-3]

糜胰蛋白酶是糜蛋白酶和胰蛋白酶的混合晶体，具有两种酶的性质。水解酪蛋白的活力与糜蛋白酶相当，水解苯甲酰酪氨酸乙酯的活力相当于糜蛋白酶的3倍，水解酯键的活力与胰蛋白酶相似。干燥情况下稳定，液体状态易失活，PH7—8时活性最强。

糜胰蛋白酶

糜蛋白酶又称为胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin），是一种典型的色氨酸（Trp）蛋白酶，脊椎动物的消化酶，EC 3.421.1。是从牛（猪）的新鲜胰腺中提取分离出的肽链内切酶。α-糜蛋白酶的一级结构和立体结构已被阐明，是由245个氨基酸残基组成的单一肽链，分子中有5对二硫键。呈白色、微黄色结晶或无定形粉末，易溶于水，不溶于有机溶剂。相对分子质量24000，最适PH8~9。干态稳定，水溶液中会迅速失活，以PH3~4的水溶液为最稳定。作用于蛋白质时，优先水解L-酪氨酸（L-Tyr)和L-苯丙氨酸(L-Phe)的羧基所形成的肽键。

而胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种，EC3.4.21.4。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

糜蛋白酶可用来治疗各种炎症如：对于慢性支气管炎、支气管哮喘、胃炎、宫颈炎、盆腔炎、化脓性中耳炎、角膜炎、前列腺炎、栓塞性静肪炎、脑血栓形成等均有一定疗效。对炎性水肿、血肿、术后粘连、溃疡、血栓等也有一定疗效。但是，注射时有局部刺激，可引起过敏反应。口服时勿嚼碎，以免被胃蛋白酶破坏而失效。有严重肝功能障碍和血凝功能不正常者禁用。肌注，一日1～2次，每次5mg，以2ml苯甲醇注射液或生理盐水溶解后注射，疗程10～10日。用于预防或控制复发，每周注射2～3次，每次5mg，外用：以生理盐水溶解后纱布浸湿外敷，或与抗生素软膏拌匀后涂纱布上外敷，每日换药1～2次。

糜胰蛋白酶生产方法^[4][5]

取将新鲜或冷冻锗胰，解冻、洗净并投入绞肉机绞碎，按照猪胰浆量加2倍量体积的硫酸溶液（0.125mol/L），搅拌均匀，搅拌下提取1h，调节PＨ３右左，于40放置过夜。次日，用双层纱布过滤，滤渣用等体积冷硫酸溶液（0.125mol/L），重复提取1次，合并2次滤液，得提取液。

猪胰脏H{2SO4;pH3;40→提取提取液

分段盐析在不断搅拌下，将提取液中逐渐加入工业用硫酸铵一定量，使硫酸铵的饱和度达25%。再加少量活性白陶土一定量助滤，放置低温处，1d后过滤，滤液再加硫酸铵（CP）同上操作，得复2次，收集25%～65%饱和度沉淀部分，得粗制滤饼。

提取液(NH4)2SO4→分段盐析粗制滤饼

透析、盐析将粗滤饼用3倍体积的冷蒸馏水溶解，在低温下对pH5.5的乙酸缓冲液（0.01mol/L）透析，过滤，在清液加硫酸铵（CP）一定量，至硫酸铵饱和度达65%，将沉淀抽滤，得透析滤饼。

粗制滤饼pH5.5;醋酸缓冲液；(NH4)2SO4→透析；盐析透析滤饼

盐析、除杂质将透析饼在3倍体积冷蒸馏水溶解，调节pH3～3.5，加硫酸铵（CP）一定量，至硫酸铵饱和度达25%，室温下放置3～5h后，用0.5%活性炭助滤，得澄清滤液。然后在不断搅拌下，将100ml的澄清滤液缓慢加入预热至250左右的乙醇10ml（乙醇浓度达10%），在室温下放置3h后过滤，得澄清滤液。

参考文献

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