磷脂酰乙醇胺的应用与提纯

发布日期:2022/12/19 14:36:15

磷脂是一种从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂混合物一般用卵磷脂来统称这种混合物。其主要成分是卵磷脂（磷脂酞胆碱）、脑磷脂（磷脂酞乙醇胺）、肌醇磷脂（磷脂酞肌醇）、磷脂酸及丝氨酸磷脂（磷脂酞丝氨酸）。

磷脂酰乙醇胺的应用

磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl ethanolamine, PE)，又称为脑磷脂，是构成生物膜的重要磷脂之一，主要存在于脑、神经、微生物和大豆中，在信号传导和维持生命功能等方面发挥重要作用。因此，磷脂酰乙醇胺的测定对于研究生物膜的生物活性及功能具有重要意义。脑磷脂其分子结构和卵磷脂相似只是以氨基乙醇代替了胆碱，具有α、b两种异构体。脑磷脂水解后可得到甘油、脂肪酸、磷酸和乙醇胺。脑磷脂以动物脑组织中含量最多约占脑千物质总量的4-6%。

磷脂酰乙醇胺的结构式

用作医药品的卵磷脂必须具有较高的纯度,才能保证给药的安全性.特别是作为静脉注射用脂肪乳化剂的卵磷脂以及用于治疗心血管疾病, 神经系统疾病的卵磷脂针剂产品纯度要求更高(脑磷脂含量应低于5%),否则将产生不良反应。因此，分离卵磷脂和脑磷脂具有重要的研究意义。

磷脂酰乙醇胺的分离

目前分离两种磷脂的方法包括溶剂萃取法、柱层析法、膜分离法等。其中，柱层析法是目前实验室及工业常用的方法。一般是采用吸附柱层析和离子交换柱层析法。为了达到分离效果必须对柱层析条件如柱的几何形状、填充方法、填充物颗粒大小、温度、样品用量、流速、洗脱液的组成等因素加以选择和控制。选用的吸附剂一般为硅胶、氧化铝、二氧化硅等。洗脱液常选用氯仿、低级醇等种溶剂的混和物也可采用梯度洗脱^[1]。

实验室柱层析法分离操作如下^[2]：

称取45 g已活化好的柱层析用硅胶，加入适量氯仿浸泡过夜.用玻棒搅拌硅胶使之悬浮于氯仿中，成为糊状浆料.然后将浆料沿着层析柱壁慢慢地倾倒入层析柱中，边加边搅拌，一次加完，同时将层析柱下面的旋塞打开，以利于硅胶沉降。此时应注意不要有气泡产生，倾倒至离柱顶5 cm处时，停止加料，并关掉旋塞，静置一夜，让硅胶完全沉降。

称取适量卵磷脂粗品溶于氯仿中，打开旋塞，用2～3倍柱体积的氯仿液流过层析柱以保证平衡，调整好滴速。当氯仿液面恰好到达硅胶床层顶面时，立即关上旋塞。用一支注射器沿柱壁将样品溶液慢慢铺在床层顶面，以减少对床层的扰动。

打开旋塞,慢慢排出下部流出液,使样品进入顶面,再用氯仿小心地洗涤上部柱壁,直到柱层上面有(1～2)cm的溶液.连接柱的进口，用一定浓度的甲醇/氯仿混合液进行梯度洗脱，梯度差为甲醇/氯仿体积比为(1∶2)～(2∶1)。用自动部分收集器收集流出液，用紫外检测仪监测。分别合并含脑磷脂和卵磷脂的洗脱液进行浓缩、干燥，称重。