人环磷酸腺苷(CAMP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人环磷酸腺苷(CAMP)ELISA KIT用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中环磷酸腺苷(CAMP)的含量。

实验原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被环磷酸腺苷(CAMP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷(CAMP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人环磷酸腺苷(CAMP)ELISA KIT

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于不同砾石土对骏枣果实品质及环磷酸腺苷（cAMP）含量的影响研究

以骏枣为研究对象,针对不同砾石土,对不同物候期的土壤理化性质进行测定与分析的基础上,运用因子分析法对不同砾石土条件下的骏枣枣果品质进行综合分析与评价,对不同砾石土条件下骏枣中cAMP含量进行分析。

同时,运用多元回归统计分析法对不同砾石土条件下不同物候期土壤养分与骏枣枣果品质及骏枣中cAMP含量的关系进行综合分析,从而做到因土制宜,为不同砾石土条件下的骏枣种植提供一定的参考。

取得以下结果:（1）不同砾石土条件下,不同物候期土壤理化性质有一定的差异性,就试验结果来看,轻砾石土有一定的优越性,尤其是开花期至果实成熟期,都保持一定的有利于骏枣果实品质形成的较好的土壤理化性质。

（2）通过因子分析,对三种砾石土条件下的骏枣枣果品质进行对比分析,提取出具有代表性的2个相互独立的公因子,从而避免了重复指标在综合评价过程中的干扰。结果显示:轻砾石土条件下的骏枣枣果品质排在,其主要优势为平均单果重大、含水率、可食率、果肉密度、可溶性糖、可滴定酸、糖酸比、维生素c、可溶性蛋白质、黄酮含量、P含量较高、单宁含量低;中砾石土条件下骏枣枣果品质其次,主要体现在游离氨基酸、N含量、K含量高,而重砾石土壤条件下枣果品质明显低于轻砾石土与中砾石土。

（3）不同砾石土条件下,骏枣中cAMP含量有所差异,实验表明,轻砾石土条件下骏枣中cAMP含量最高,而重砾石土条件下骏枣中cAMP含量最低,通过对cAMP含量较高的土壤条件与较低的土壤条件进行对比分析,可以更加明确的发现促进和制约其含量提高的土壤因子,从而为提高骏枣中cAMP含量提供一定的参考。

（4）研究表明3种不同的砾石土条件下,不同物候期土壤养分与枣果品质之间表现出不同的相关性,只有对不同砾石土条件下的果实品质与土壤养分进行综合的分析,才能做到因土制宜,从而为合理的进行枣树的栽培种植以及枣园的管理提供一定的参考。

参考文献

[1]Implications of short‐range spatial variation of soil bulk density for adequate field‐sampling protocols:methodology and results from two contrasting soils[J].R.M.Lark,B.G.Rawlins,D.A.Robinson,I.Lebron,A.M.Tye.Eur J Soil Sci.2014(6)

[2]Accounting for Time‐Variable Soil Porosity Improves the Accuracy of the Gradient Method for Estimating Soil Carbon Dioxide Production[J].Wei Han,Yuanshi Gong,Tusheng Ren,Robert Horton.Soil Science Society of America Journal.2014(4)

[3]Influence of land use on soil moisture spatial–temporal variability and monitoring[J].G.Zucco,L.Brocca,T.Moramarco,R.Morbidelli.Journal of Hydrology.2014

[4]Sweet potato（Ipomoea batatas L.）leaves as nutritional and functional foods[J].Hongnan Sun,Taihua Mu,Lisha Xi,Miao Zhang,Jingwang Chen.Food Chemistry.2014

[5]张少博.不同砾石土对骏枣果实品质及环磷酸腺苷（cAMP）含量的影响研究[D].新疆农业大学,2018.