化学发光底物-鲁米诺(诊断级)
发布日期:2022/11/29 13:35:16
化学发光是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质在进行化学反应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应产物分子激发到电子激发态。当电子从激发态的最低振动能级回到基态的各个振动能级时产生辐射,多余的能量以光子的形式释放出来,这一现象称为化学发光。发光免疫分析(luminescence immunoassay,LIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合,用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。LIA具有灵敏度高、特异性强、无放射性危害等优点,已部分取代放射免疫分析应用于生物学、医学研究和临床实验诊断中。
鲁米诺(英文:Luminol),或称发光胺、光敏灵、流明诺,是通用的发光化学试剂,与适当的氧化剂混合时会发出引人注目的蓝色光。它是白色至淡黄色的晶体,可溶于大多数有机极性溶剂,但不溶于水。法医学上使用鲁米诺来检验犯罪现场含有的痕量血迹,生物学上则使用鲁米诺来检测细胞中的铜、铁及氰化物的存在。
化学发光
鲁米诺只有用氧化剂处理过才会发光。通常使用双氧水和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在铁化合物催化下,双氧水分解为氧气和水:2H2O2 → O2 + 2H2O
实验室中常以铁氰化钾作为催化剂铁的来源,而法医学上的催化剂则恰好是血红蛋白中的铁。很多生物系统中的酶也可催化过氧化氢的分解反应。
鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子(Dianion,见图),它可被过氧化氢分解出的氧气氧化,产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定,立即分解出氮气,生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中,释放的能量以光子的形式存在,波长位于可见光的蓝光部分。
应用
一种化学发光底物液,包含发光剂溶液和氧化剂溶液,其特征在于,所述发光剂溶液中含有4-羟基联苯0. Γ1. 0 mmol/L4-碘代苯基硼酸0.03〜0.5 mmol/L鲁米诺或鲁米诺衍生物广15 mmol/L0.2 mol/L硼酸-硼砂缓冲液pH 8. (Γ9.0,所述氧化剂溶液中含有:过氧化脲0. 5〜10 mmol/L,吐温20 0. 05、. 5%,其为体积百分比,0.2 mol/L磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐缓冲液的PH为6. 5〜7. 8。 鲁米诺是一种重要的化学发光试剂,它的氧化反应需要在碱性缓冲液中进行,在过氧化氢存在下形成激发态中间体,当回到基态时发光,波长为425nm。早期是使用鲁米诺直接标记抗原/抗体,但近年来已改用过氧化物酶标记抗体,以鲁米诺作为发光底物,Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。