人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒用于定量检测人类血清或血浆中抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)自身IgG抗体。

实验原理:人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)水平。用纯化的人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)，再与HRP标记的抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)的浓度。

人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）去除颗粒。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

操作程序

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎中的研究

探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（Anti-mutated citrullinated vimentin antibody,Anti-MCV）在类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）诊断中的意义,同时探索了其与RA病情评估和RA肺间质病变的关系。

方法：本研究对象分为三组,RA组、非RA组和健康对照组,RA组选择患者75例,诊断依据是美国风湿病学会（ACR）1987年修订的RA分类标准或2009年美国风湿病学会（ACR）和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）提出的新的RA分类标准。非RA组为在我院风湿免疫科同期住院的其他结缔组织病患者81例,所有患者均符合目前国内外公认的诊断结缔组织病的标准。健康对照组60例,均来自同期在我院体检中心进行身体检查的健康体检者。所有研究对象均采集清晨空腹肘静脉血3ml,离心后取血清于-20℃保存待批量检测。

采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）定量检测75例RA患者及81例非RA患者血清的抗MCV抗体、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子IgA型（RF-IgA）、类风湿因子IgG型（RF-IgG）和类风湿因子IgM型（RF-IgM）,同步应用间接免疫荧光法（IIF）测定抗角蛋白（AKA）抗体和抗核周因子（APF）,检测60例健康对照组的抗MCV抗体和抗CCP抗体,绘制受试者工作曲线（ROC曲线）评价抗MCV抗体和抗CCP抗体诊断RA的价值,并分析抗MCV抗体与抗CCP抗体、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、AKA、APF的相关性。同期收集RA组患者的相关临床数据（性别、年龄、病程、关节肿胀数、关节压痛数、28个关节疾病活动度评分）、实验室数据（血沉、C反应蛋白）和超声数据（灰阶超声半定量评分、能量多普勒半定量评分、滑膜炎超声评价总分、骨侵蚀个数）,分析抗MCV抗体与RA临床及超声病情评估的关系。

最后,分析了抗MCV抗体与RA肺间质病变的关系,建立了RA肺间质病变的Logistic逐步回归方程,初步筛选其相关危险因素。

结果：1、各个抗体阳性率的比较：RA组抗MCV抗体、抗CCP抗体、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、AKA、APF的阳性率（85.33%、77.33%、74.67%、16.00%、88.00%、44.00%、68.00%）均显著高于非RA组（12.35%、2.47%、16.05%、0.00%、25.00%、2.47%、2.47%,P均＜0.05）；RA组抗MCV抗体、抗CCP抗体的阳性率（85.33%、77.33%）均显著高于健康对照组（1.67%、0.00%,P均＜0.05）；非RA组抗MCV抗体的阳性率高于健康对照组（12.35%VS1.67%,P＜0.025）,非RA组抗CCP抗体的阳性率高于健康对照组（2.47%VS0.00%,P＞0.025）。

2、抗MCV抗体与抗CCP抗体诊断价值的比较：抗MCV抗体的敏感性（85.33%）高于抗CCP抗体（77.33%）,但差异没有统计学意义（P＞0.05）；抗MCV抗体特异性（92.2%）低于抗CCP抗体（98.58%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。两者的Youden指数分别为0.7591和0.7753,总符合率分别为0.8981、0.9120；抗MCV与抗CCP抗体联合检测的敏感性和特异性分别为93.33%、92.2%,除了特异度稍低于抗CCP抗体外,其总符合率与Youden指数均,分别为0.9259、0.8553。

参考文献

[1]Extra-articular rheumatoid arthritis[J].Carl Turesson.Current Opinion in Rheumatology.2013(3)

[2]Different risk factors between interstitial lung disease and airway disease in rheumatoid arthritis[J].Shunsuke Mori,Yukinori Koga,Mineharu Sugimoto.Respiratory Medicine.2012(11)

[3]Atherosclerosis and Rheumatoid Arthritis:More Than a Simple Association[J].Lorenzo Cavagna,Nicola Boffini,Giovanni Cagnotto,Flora Inverardi,Vittorio Grosso,Roberto Caporali,Miguel A.González-Gay.＜journal-title＞Mediators of Inflammation.2012

[4]Evaluation of Anti-Mutated Citrullinated Vimentin Antibodies,Anti-Cyclic Citrullinated Peptide Antibodies and Rheumatoid Factor in Omani Patients with Rheumatoid Arthritis[J].Ahmed Al-Shukaili,Saif Al-Ghafri,Safia Al-Marhoobi,Juma Alkaabi,Ruben Burgos-Vargas.International Journal of Rheumatology.2012

[5]庹航行.抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎中的研究[D].中南大学,2014.