SW620 人结肠癌细胞的应用

背景[1-3]

SW620人结肠癌细胞是从一个51岁男性白人组织中分离得到的，由A·Leibovitz等从一个淋巴结建株。SW620细胞主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成;SW620细胞仅合成少量癌胚抗原(CEA)，在裸鼠中有高度的致瘤性。

细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染。

2）在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给细胞拍照各2-3张（10×，20×都要拍照），作为售后的依据。

3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

SW620人结肠癌细胞

细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM培养基；马血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于RNA干扰STAT3基因促进人结肠癌细胞sw620凋亡及分子机制的实验研究

利用RNAi技术特异性抑制人结肠癌sw620细胞中STAT3基因的表达，然后对细胞水平上的抗肿瘤作用和机理进行研究。

方法：将针对STAT3基因的干扰短发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）克隆到pGenesil-1质粒表达载体中，命名为p-shSTAT3。P-shSTAT3质粒转染sw620细胞48h后，利用RT-PCR和Western blot技术检测STAT3基因mRNA和蛋白水平上的表达情况。利用Hochest33258染色对转染p-shSTAT3后sw620细胞的凋亡情况进行检测；利用Western blot技术对p53、Caspase3、Bax、Bcl-xL和Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达情况进行了检测。

结果：转染p-shSTAT3质粒能在细胞水平上有效抑制sw620细胞中STAT3基因在mRNA和蛋白水平上的表达。Hochest33258染色表明在sw620细胞中干扰掉STAT3基因的表达能显著诱导细胞凋亡的发生（P＜0.05），乱序对照p-shSc无明显的促凋亡作用。对作用机理进行研究后发现，在sw620细胞中干扰掉STAT3基因的表达促进了p53、Caspase3和Bax三个凋亡诱导蛋白的表达；同时抑制了凋亡抑制蛋白Bcl-xL和Bcl-2的表达。

结论：利用RNA干扰技术抑制掉sw620细胞中STAT3基因的表达能有效诱导p53、Caspase3和Bax的表达；抑制Bcl-xL和Bcl-2的表达，进而产生促进sw620细胞凋亡发生的抗肿瘤作用，为结肠癌治疗提供了新的研究思路和作用靶点。

参考文献

[1]siRNA vs.shRNA:Similarities and differences[J].Donald D.Rao,John S.Vorhies,Neil Senzer,John Nemunaitis.Advanced Drug Delivery Reviews.2009(9)

[2]Constitutive Activation of JAK3/STAT3 in Colon Carcinoma Tumors and Cell Lines[J].Quan Lin,Raymond Lai,Lucian R.Chirieac,Changping Li,Vilmos A.Thomazy,Ioannis Grammatikakis,George Z.Rassidakis,Wei Zhang,Yasushi Fujio,Keita Kunisada,Stanley R.Hamilton,Hesham M.Amin.The American Journal of Pathology.2005(4)

[3]Immunohistochemical analysis of the mutant epidermal growth factor,ΔEGFR,in glioblastoma[J].Ryo Nishikawa,Tatsuya Sugiyama,Yoshitaka Narita,Frank Furnari,Webster K.Cavenee,Masao Matsutani.Brain Tumor Pathology.2004(2)

[4]Constitutive Activation of Stat3 Signaling Confers Resistance to Apoptosis in Human U266 Myeloma Cells[J].Immunity.1999(1)

[5]施露.RNA干扰STAT3基因促进人结肠癌细胞sw620凋亡及分子机制的实验研究[D].重庆医科大学,2013.