异麦角甾苷的制备

背景及概述^[1]

肉苁蓉为肉苁蓉属植物干燥带鳞叶的肉质茎，主治男子阳痿、 女子不孕、 血枯便秘等证，有“沙漠人参”之称。近 20 年来的药理活性研究发现，肉苁蓉可防治神经退行性疾病，能明显地上调α3 和α7 尼古丁受体蛋白质的表达水平。从肉苁蓉中分离得到的单体化合物异麦角甾苷是主要活性成分之一。

制备^[1]

1、异麦角甾苷粗提物的制备

取肉苁蓉粗粉 3 kg，用 10 倍量的水提取 3 次，每次 2 h，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度约为 1.1 (70～80 ℃) 的清膏，在搅拌下加入乙醇，醇沉质量分数为70%，沉淀 24 h，取上清液，滤过。滤液回收乙醇并浓缩至相对密度约为 1.2 (70～80℃ ) 的乙醇浸膏。取浸膏加水分散，分别用石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇萃取。回收正丁醇萃取物。

2、异麦角甾苷对照品的制备纯化

取正丁醇萃取物上 Sephadex LH-20，用氯仿-甲醇 (1:1 ) 洗脱，薄层点板跟踪，合并对应流份，取异麦角甾苷粗提物 0.42 g，用10 mL 甲醇超声溶解，过 0.45 μm 滤膜，备用。 吸取 1.0 mL 样品进半制备型高效液相色谱仪，收集保留时间所在的组分，减压回收溶剂，得异麦角甾苷粉末。

3、 纯度分析

3.1薄层色谱分析

薄层板: 高效薄层层析板 ( GF254 )。 取本品加甲醇制成质量浓度为 1 g / L 溶液，作为供试品溶液。采取上行展开方式，展距为8～10 cm。3种展开剂系统为氯仿-甲醇-9% 的乙酸 (10∶3 ∶0.5 ) ；二氯甲烷-甲醇-9% 的乙酸(10∶ 2∶0.4 )；乙酸乙酯－甲醇－9% 的乙酸 (10∶0.5∶0.6 )。定位后经 254 nm 紫外波长碘、三氯化铁( FeCl₃) 溶液显色检视。结果经 3 个展开系统 3 种观察方式检识均呈单一斑点，未见杂质斑点，符合化学品要求。

3.2面积归一化法

精密称取异麦角甾苷对照品，用流动相制成质量浓度为1.0 g/ L 的样品溶液，用光电二极管阵列 ( DAD) 检测器检测，选定在 350，335，305，290，250 nm 波长处测定，记录色谱图的时间为异麦角甾苷出峰时间的 2 倍以上，各波长下的峰面积按归一化法计算。结果异麦角甾苷对照品在检测时间范围内基本无杂质峰出现，且在所选定 5 个波长处测得的平均含量为 98.8% ，符合化学对照品用于含量测定的要求，见图A。      

4、结构鉴定

异麦角甾苷为无色棱状柱晶(乙醇) ，熔点为 135℃。ESI-MS m/z: 623 [M-H] ⁺，¹H NMR( CD₃OD，400 MHz) ，δ: 1.24 (3H，d，J = 6.0 Hz，Rha-CH3 )，2.78 (2H，t，J = 7.2，8.0 Hz，H-7 )，4.36 (1H，m，H-1' )，5.17 (1H，s，Rha-1 ) ， 6.30 (1H，d，J = 16.0Hz，H-8″)，6.53 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-6 )，6.65 ( 1H，t，J = 10.0，8.4 Hz，H-5 )，6.76 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-2 )，6.87 (1H，d，J =2.0 Hz， H-5″ )，6.89 (1H，t，J = 10.0，2.0 Hz，H-6″ ) ，7.02 (1H，s，H-2″ )，7.57 (1H， d，J = 15.9 Hz，H-7″ )。

应用^[2]

车前子提取物，是由车前子经过2～6倍体积的体积分数为60～90％ 的乙醇水溶液回流提取2～6次得到，含有麦角甾苷、异麦角甾苷、京尼平苷酸、 阿魏酸、车前素A和车前素B。该车前子提取物可用于制备治疗糖尿病药物。

主要参考资料

[1]白雪,郝小燕.肉苁蓉中异麦角甾苷标准品的制备及含量测定[J].中国药业,2013,22(09):19-20.

[2] CN201110172511.8 一种车前子提取物及其应用