T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体的应用

背景^[1-3]

T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体是一类可以特异性结合T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51的多克隆抗体，主要用于体外检测T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫学实验。

T淋巴细胞（T-lymphocyte）来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体免疫组化

胸腺依赖性抗原（thymus dependent antigen，TD-Ag，T cell-dependent）指需在抗原提呈细胞参与及T细胞辅助下，才能刺激B细胞产生抗体的抗原性物质，称为TD-Ag。如细胞、病毒及各种蛋白质均为TD抗原。

TD-Ag活化成熟的B细胞，诱导产生lgG类抗体，能引起回忆应答。同时也可以诱导细胞免疫应答。先天性胸腺缺陷和后天性T细胞功能缺陷的个体，TD-Ag诱导其产生抗体的能力明显下降。

应用^[4][5]

用于TDAG51过表达诱导PC12细胞凋亡研究

TDAG51基因是一个凋亡相关基因,最初在T细胞中被克隆。Fas受体在免疫系统中发挥重要作用,参与活化诱导的细胞凋亡（AICD,activation-induced cell death）;在活化的T细胞中Fas的表达有赖于TDAG51基因,TDAG51?的T细胞Fas表达缺陷,因此认为TDAG51具有促进活化T细胞凋亡的作用,在免疫自稳中发挥重要作用。TDAG51基因在体内各组织都有表达,而TDAG51基因在这些组织中的功能仍然不清。

近来有关TDAG51基因的研究引起人们的关注。TDAG51是PQR（proline-glutamine-rich）蛋白,在其C-端富含PQ即脯氨酸和谷氨酰胺。富含PQ模序（motif）的蛋白具有促进海马细胞、中隔细胞（septal cell）的凋亡的作用,而且这种凋亡是Fas非依赖的。甚至有的研究认为TDAG51基因是一个抑癌基因,由于其同TSSC3、Tih等基因的结构相似而将其归为一个家族。

TDAG51基因在脑组织中表达比较丰富,目前有关其在神经系统中的作用研究的比较少。神经细胞的凋亡可发生在很多种情况下,异常的神经元凋亡可以导致一些神经退行性疾病,如阿茨海默病（Alzheimer’s disease）、帕金森病（Parkinson’s disease）,这些疾病严重威胁着人们的健康。虽然人们已经意识到其危害,但在临床上仍没有有效的治疗方法。深入理解这些疾病的发生机制和神经细胞异常凋亡发生的过程,将有利于设计针对性的有效的预防和治疗策略。

实验设计以PC12细胞作为神经细胞的体外模型,探究TDAG51基因在神经系统中是否像在T细胞中那样,具有促进凋亡的作用,并初步探讨其机制。

方法:实验分为三组,实验组是用表达克隆载体绿色荧光蛋白质粒（pEGFP-C1）载体转染外源性TDAG51的PC12细胞;空载体对照是转染空载体pEGFPC1的PC12细胞;对照组是未转染的PC12细胞。在转染后24h、48h、72h收集PC12细胞,用Western blotting检测了DAG51蛋白,比较实验组细胞和各对照组细胞TDAG51蛋白的表达量;质粒转染后48h在相差显微镜和荧光显微镜下观察PC12细胞形态的差别;质粒转染后48h用Hoechst33258染色,观察三组细胞细胞核形态的差别;在高倍镜下,随机选取10个视野,计数凋亡细胞,做统计学分析;转染后18h,加入caspase-9抑制剂,观察细胞凋亡的变化。

参考文献

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