3-羟基-4-甲氧基肉桂酸的应用

背景及概述^[1][2]

3-羟基-4-甲氧基肉桂酸中文别名异阿魏酸、3-羟基-4-甲氧基苯丙烯酸。升麻属植物是毛莨科升麻族植物的主要成员，《中国药典》（2005年版）收载的常用中药升麻的原植物有3种即大三叶升麻、兴安升麻和升麻，在我国分布区域广，资源量大。升麻中含有异阿魏酸、三萜化合物、香豆素等成分，其中异阿魏酸具有解热、镇痛、消炎的作用，2010年版《中国药典》中即规定以异阿魏酸作为衡量升麻药材质量的指标成分。

应用^[1-3]

异阿魏酸是升麻等中药材提取物中的主要单体活性成分，具有抗氧化、降血糖的作用。有研究通过胶原诱导关节炎(Collagen induced arthritis，CIA)的动物模型实验发现：异阿魏酸及包含异阿魏酸的中药(如升麻)对CIA造成的多发性关节损伤具有保护作用，能够明显降低CIA动物模型的发病率、关节炎平均指数、改善骨结构破坏、降低抗二型胶原抗体和多种炎性细胞因子的分泌，说明其具有确切的抗关节炎症的作用，可以用来制备治疗或缓解类风湿性关节炎症状的药物或保健品。

此外，还有研究观察阿魏酸和异阿魏酸对HepG2 细胞中细胞色素P450 同工酶1A1、3A4（CYP1A1、CYP3A4）的作用特点。采用MTT 比色法测定不同质量浓度阿魏酸和异阿魏酸对体外培养人肝癌HepG2 细胞增殖的影响；采用流式细胞术测定阿魏酸和异阿魏酸对HepG2 细胞周期的影响；实时定量PCR 技术检测阿魏酸和异阿魏酸处理后CYP1A1、CYP3A4 mRNA的表达；Western blotting 检测CYP3A4 蛋白表达。结果显示作用48 h 后，阿魏酸和异阿魏酸对HepG2 细胞均有抑制作用，且有明显的剂量依赖关系；阿魏酸和异阿魏酸（50 μg/mL）均阻滞HepG2 细胞周期于G2/M 期；阿魏酸和异阿魏酸在不同作用质量浓度下均是CYP1A1、CYP3A4 mRNA 的抑制剂；50 μg/mL 阿魏酸和异阿魏酸处理细胞48 h 后，CYP3A4 蛋白表达均明显低于对照组，相比于对照组，阿魏酸和异阿魏酸的表达量分别为0.57、0.39。结论 阿魏酸和异阿魏酸均能抑制HepG2细胞的增殖，其机制之一是影响细胞周期使其阻滞于G2/M 期，能够抑制药物代谢酶CYP1A1、CYP3A4 mRNA 的表达，同时抑制CYP3A4 的蛋白表达，但作用程度差别较大，可能与其羟基和甲氧基异构有关。

此外，异阿魏酸还可用作医药中间体，如制备3，4-二氢-4-芳基香豆素类化合物。3，4-二氢-4-芳基香豆素类化合物作为4-芳基香豆素的氢化衍生物，具有与其相似的生物活性、研究表明4-(4'-羟基苯基)-5，7-二羟 基-8-烷基-3，4-二氢香豆素具有雌激素样作用。如4-(3'-羟基-4'-甲氧基苯基)-7，8-二羟基-3，4-二氢香豆素的制备的制备如下：在100ml的三口反应瓶中，加入0.97g(5mmol)3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸（异阿魏酸），0.69g(5.5mmol)邻苯三酚，10ml(98mmol)硝基苯，搅拌均匀，加热至100℃，再加入2g硫酸酸 化的蒙脱土K-10，TLC检测反应进程(展开剂：二氯甲烷：甲醇＝10：1)，10小时后反应完毕，趁热过滤，滤液中加20ml石油醚，放置一夜自然析晶，抽滤，20ml石油醚洗涤沉淀，乙酸乙酯-石油醚重结晶，真空干燥箱中干燥得白色纯品0.70g，产率46.4％。

制备 ^[4-5]

方法1：一种ASE方法提取升麻中异阿魏酸的方法，包括以下步:骤：步骤1：将升麻粉碎后，过筛；步骤2：称取0.5重量份升麻粉，与1重量份石英砂混合均匀待用；步骤3：在预先放好过滤膜的萃取池中加入适量的石英砂至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；萃取条件为：萃取溶剂为40％甲醇水溶液；萃取温度120℃；静态萃取时间5min；冲洗体积60％；静态循环次数4次；所述的40％甲醇水溶液为甲醇的体积百分数为40％。

方法2： 在100ml的三口反应瓶中加入25g(240mmol)丙二酸，30.4g(200mmol)3-羟基-4- 甲氧基苯甲醛，40ml(496mmol)吡啶，2ml(20.4mmol)六氢吡啶，加热至75℃后回流6h，反应完毕，冷却10min，加入150ml3mol/ml冰盐酸溶液，放置一夜，抽滤，用1000ml水洗涤沉淀，得到白色粗品。粗品用无水乙醇重结晶，得白色纯品3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸34.4g，收率 88.6％。

含量测定^[6]

一种测定升麻中异阿魏酸含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法用丙二醇萃取粉碎后的升麻，并收集丙二醇萃取液；其中，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将升麻样品粉碎，过筛，取0.5g与1g石英砂混合均匀；步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有滤膜的10ml ASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行；步骤S3：用浓度为20％～40％的丙二醇萃取，并用浓度为20％～40％的丙二醇定 容至50ml，离心，取上清液。

步骤2：采用HPLC法测定丙二醇萃取液中异阿魏酸的含量。

主要参考资料

[1] CN201810607664.2 异阿魏酸、含异阿魏酸中药提取物及升麻的用途

[2] 阿魏酸和异阿魏酸对HepG2 细胞增殖及其细胞色素P450 酶的影响

[3] CN201510931537.4 一种3，4-二氢-4-芳基香豆素类化合物的制备方法

[4] CN201610254586.3 一种ASE方法提取升麻中异阿魏酸的方法

[5]  CN201610495985.9 一种4-芳基香豆素类化合物的制备方法

[6] CN201711363285.5 一种测定升麻中异阿魏酸含量的方法