人肌酸激酶(CK)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人肌酸激酶（CK）的含量。

实验原理:

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人肌酸激酶（CK）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肌酸激酶（CK）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒

样本处理及要求:

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算:

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于母体血清中CK、AFP联合β-hCG对产前胎盘植入的预测价值研究

探讨母体血清中肌酸激酶（Creatine kinase,CK）、甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein,AFP）及β-人绒毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotropin,β-hCG）单项指标对产前胎盘植入（Placenta increta,PIA）的预测价值;

2. 探讨母体血清中CK、AFP及β-hCG三项指标联合预测胎盘植入的预测价值;

3.计算出母体血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值（Cut off value,cut off值）。

方法:收集存在发生胎盘植入高危因素且以剖宫产终止妊娠的孕妇102例。根据术中所见及术后病理组织学诊断（子宫平滑肌中可见绒毛）分为胎盘植入组及非胎盘植入组,胎盘植入组包括胎盘粘连28例,胎盘植入20例,穿透性胎盘植入2例,共50例,即实验组;将具有相同或相似高危因素而未发生胎盘植入的孕妇52例为非胎盘植入组,即对照组,同时随机选择以剖宫产终止妊娠而无高危因素的正常孕妇60例为空白对照组。

选择SPSS25.0进行数据统计,计量数据采用（`X±s）表示,多组间比较采用单因素方差分析,绘制受试者工作特征曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC曲线）,并计算曲线下面积（Area under curve,AUC）,得出CK、AFP及β-hCG单独预测胎盘植入的灵敏度、特异度、诊断符合率及三者联合预测胎盘植入的灵敏度、特异度、诊断符合率,利用约登指数计算出CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的cut off值。当P<0.05时,差异具有统计学意义。

高危因素:剖宫产手术史、高龄产妇、多次生产史、多次刮宫及人流等宫腔内操作史。

结果:实验组孕妇血清中CK、AFP及β-hCG水平显著高于对照组及空白对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;血清CK对胎盘植入的敏感度为42.67%,特异度52.68%,诊断符合率69.72%,血清AFP对胎盘植入的敏感度为65.78%,特异度60.24%,诊断符合率71.68%,血清β-hCG对胎盘植入的敏感度为67.38%,特异度69.46%,诊断符合率73.09%,三者联合对预测胎盘植入的灵敏度分别为:79.04%,特异度分别为:81.57%,诊断符合率80.67%;实验组孕妇血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值分别是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。

结论:1.实验组母体血清中CK、AFP及β-hCG的水平均明显高于对照组及空白对照组;

2.母体血清中CK、AFP及β-hCG对胎盘植入具有一定的预测价值,尤其三者联合筛查对产前胎盘植入的预测价值明显升高;

3.实验组母体血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值分别是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。

参考文献

[1]Serum angiogenic profile in abnormal placentation[J].Ebru Biberoglu,Ayse Kirbas,Korkut Daglar,Kutay Biberoglu,Hakan Timur,Canan Demirtas,Erdem Karabulut,Nuri Danisman.The Journal of Maternal-Fetal＆Neonatal Medicine.2016(19)

[2]Abnormal Placentation:Placenta Previa,Vasa Previa,and Placenta Accreta[J].Robert M.Silver.Obstetrics＆Gynecology.2015(3)

[3]Accuracy of ultrasound for the prediction of placenta accreta[J].Zachary S.Bowman,Alexandra G.Eller,Anne M.Kennedy,Douglas S.Richards,Thomas C.Winter,Paula J.Woodward,Robert M.Silver.American Journal of Obstetrics and Gynecology.2014

[4]Elevated first trimester PAPP‐A is associated with increased risk of placenta accreta[J].N.Desai,D.Krantz,A.Roman,A.Fleischer,S.Boulis,B.Rochelson.Prenat Diagn.2014(2)

[5]李红.母体血清中CK、AFP联合β-hCG对产前胎盘植入的预测价值[D].承德医学院,2020.