人5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人5羟色胺（5-HT）的含量，试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人5羟色胺（5-HT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人5羟色胺（5-HT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤：

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于不同工作制度下铬镍联合作用对工人机体氧化应激水平的影响

从氧化损伤的角度来研究不同工作制度及镍、铬作业对人群的危害，探讨两者的联合作用对工人机体氧化损伤的影响。

方法：对某钢铁集团不锈钢冶炼厂各种作业环境进行监测。根据生产工艺的不同，选择该钢铁企业中男性炼钢工、整模工152人作为镍、铬接触组，同时选择该企业不接触镍、铬危害的男性水处理工、皮带工146人作为对照组。通过调查问卷收集研究对象的一般情况、职业暴露情况、工龄、工作制度、吸烟和饮酒情况等，依据国家职业卫生标准监测生产环境中可溶性镍、铬化合物、粉尘、噪声、高温，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组工人晨尿中的8-OHdG的含量，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组工人血清中的Cortisol、MT、GSH、5-HT的含量，采用石墨炉原子吸收分光光度法检测各组工人晨尿中的镍、铬的含量。结果：实验组工作场所检测的镍及其化合物、铬及其化合物的含量为炼钢炉前最高，工作场所中粉尘、高温和噪声检测结果在不同的场所无差别，P值大于0.05。相同工作制度下，实验组与对照组工人体内Cortisol，5-HT，MT含量比较，差异无统计学意义（P>0.05），相同工作制度下实验组与对照组中中GSH含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

四班三运转与四班两运转工作制度下工人体内Cortisol，5-HT，MT，GSH含量相比较，差异无统计学意义（P>0.05），四班三运转与常白班工作制度下工人体内Cortisol，5-HT，MT，GSH含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）；四班两运转与常白班工作制度下工人体内Cortisol，5-HT，MT，GSH含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

同工龄组中实验组与对照组工人体内的Cortisol，5-HT，MT的含量比较，差异无统计学意义（P>0.05）；同工龄组中实验组与对照组工人体内GSH的含量相比较，，差异有统计学意义（P<0.05）；不同工龄组中，实验组和对照组工人体内Cortisol的含量相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；在实验组和对照组中，0组和5组中工人体内的Cortisol，5-HT，MT，GSH的含量相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；0组和5组与10组工人体内5-HT，MT，GSH的含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）；0组和5组与15组工人体内5-HT，MT，GSH的含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）；10组和15组工人体内5-HT，MT，GSH的含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

不同镍、铬接触组工人尿中8-OHdG含量与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；不同镍、铬接触工人尿镍、铬含量与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；不同工种组工人尿中8-OHdG及尿镍、铬含量与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），其中炼钢工组尿中8-OHdG及尿镍、尿铬含量均最高；不同工龄组工人尿中8-OHdG及尿中镍、铬含量与对照组之间比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；相关分析显示，镍、铬接触工人的工龄与工人尿中8-OHdG及尿中镍、铬含量均呈正相关关系。相同工作制度下，实验组与对照组工人体内的8-OHdG，尿镍，尿铬及GSH含量相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

参考文献

[1]8-hydroxy-2’-deoxyguanosine（8-OHdG）:A Critical Biomarker of Oxidative Stress and Carcinogenesis[J].ATHANASIOS VALAVANIDIS,THOMAIS VLACHOGIANNI,CONSTANTINOS FIOTAKIS.Journal of Environmental Science and Health,Part C.2009(2)

[2]Melatonin,sleep disturbance and cancer risk[J].David E.Blask.Sleep Medicine Reviews.2008(4)

[3]Melatonin modulates the cadmium-induced expression of MT-2 and MT-1 metallothioneins in three lines of human tumor cells（MCF-7,MDA-MB-231 and HeLa）[J].Carolina Alonso-Gonzalez,Dolores Mediavilla,Carlos Martinez-Campa,Alicia Gonzalez,Samuel Cos,Emilio J.Sanchez-Barcelo.Toxicology Letters.2008(3)

[4]Carcinogenicity of shift-work,painting,and fire-fighting[J].Kurt Straif,Robert Baan,Yann Grosse,Béatrice Secretan,Fatiha El Ghissassi,Véronique Bouvard,Andrea Altieri,Lamia Benbrahim-Tallaa,Vincent Cogliano.Lancet Oncology.2007(12)

[5]左春雨.不同工作制度下铬镍联合作用对工人机体氧化应激水平的影响[D].山西医科大学,2014.