碱性磷酸酶染色试剂盒的应用

背景^[1-3]

碱性磷酸酶染色试剂盒用于组织涂片及血涂片的碱性磷酸酶染色。

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)也称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,intestinal,ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,tissue-nonspecific isozyme,ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,placental type,也称placental alkaline phosphatase,PLAP)。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase,CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。

碱性磷酸酶染色试剂盒

干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。

应用^[4][5]

用于肠碱性磷酸酶对肠粘膜屏障功能的影响及机制研究

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase）是一种单脂磷酸水解酶,参与人体的能量代谢。它广泛分布于多个组织器官中,该酶属于同源二聚体。在肠管中位于肠粘膜的刷状边缘,能够水解单磷酸脂,称为肠碱性磷酸酶（Intestinal alkaline phosphatase,IAP）。生理状态下溶血卵磷脂能特异性的促进IAP向肠腔内释放。IAP具有维持肠粘膜细胞间的紧密连接蛋白的作用。

研究显示,IAP可以诱导闭锁小带蛋白1（Zonula occludens-1,ZO-1）、闭锁小带蛋白2（Zonula occludens-2,ZO-2）、闭锁蛋白（Occludin）,水闸蛋白（Claudin）表达水平的升高。而闭锁蛋白、水闸蛋白、闭锁小带蛋白参与构成紧密连接复合物,起到维持正常的肠粘膜屏障功能的作用。各种紧密连接蛋白的低表达可损害肠粘膜屏障功能,进而影响肠粘膜通透性。肠道细菌、内毒素、炎性介质等会通过受损的肠粘膜屏障进入内环境,导致更多炎性介质的释放,激活全身炎症反应综合征的进程,循环损害肠粘膜屏障功能,最终导致多脏器功能衰竭的发生。

鉴于胆汁丢失后肠粘膜功能障碍中IAP的作用尚未见明确报道,本研究拟明确:（1）胆汁丢失后肠粘膜屏障的形态及功能变化。（2）胆汁丢失后IAP的变化及外源性IAP治疗后对肠粘膜功能的影响。（3）进一步明确IAP在维护肠粘膜屏障功能的作用机制及与MLCK/pMLC信号通路的影响。

研究方法:选取8-10周龄的SD大鼠,通过外科手术的方法制备SD大鼠的胆汁丢失动物模型。将SD大鼠平均分成5组,包括:假手术组（10只）,梗阻性黄疸组（10只）、胆汁外引流组（10只）、梗阻性黄疸组+IAP饲养组（10只）、胆汁外引流+IAP饲养组（10只）。大鼠按不同条件饲养14天后,麻醉下处死动物,采取肠粘膜标本和门静脉血液标本。

研究方法:（1）大鼠的一般状况观察,并记录体重变化。（2）HE染色观察肠粘膜的形态变化。（3）电镜观察肠粘膜细胞超微结构的变化。（4）小肠粘膜通透性试验检测大鼠肠粘膜的通透性改变。（5）同时收集大鼠的肠粘膜细胞,检测氧化应激指标丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及抗氧化指标还原型谷胱甘肽（Reduced glutathione,GSH）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）的变化。（6）检测大鼠肠粘膜IAP和紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的蛋白表达。（7）免疫组化染色观察ZO-1在组织中的分布。

参考文献

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