抗酸染色液(试剂盒)

背景^[1-3]

抗酸染色液(试剂盒)用于抗酸菌(诺卡菌和红球菌等)染色，可鉴别抗酸菌与非抗酸菌。荧光显微镜下抗酸菌呈亮黄色，非抗酸杆菌和背景呈暗黄色。抗酸染色液(试剂盒)主要由金胺O-罗丹明染色液、脱色液、复染液组成。

抗酸杆菌并不是某一个特殊的细菌，而是指一大类细菌，特点是不太容易着色，但是通过加温或者延长冷色的时间可以着色，着色之后可以抵抗一些强酸性的脱水剂脱色，所以称之为抗酸杆菌。

抗酸杆菌中最常见的细菌就是分枝杆菌，而分枝杆菌也包括很多种，比如有结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等，其中结核分枝杆菌是引起肺结核以及其它结核的常见病原菌，可以引起人体的慢性感染，导致午后低热、盗汗、消瘦等临床症状，需要进行相应的抗结核治疗，而麻风分枝杆菌是引起麻风的病原菌，需要进行抗麻风治疗。

抗酸染色液(试剂盒)

试剂盒组成：

溶液A（取金胺0.01g溶于95%酒精10ml内。加5%石炭酸至100ml）：5ml*2

溶液B（3%盐酸酒精）：5ml*2

溶液C（0.5%高锰酸钾水溶液）：5ml*2

操作步骤

1.涂片火焰固定，平放染色架上。

2.加入溶液A盖满涂膜，染色10-15min，水洗。

3.加入溶液B盖满涂膜，脱色3-5min，至无黄色，水洗。

4.加入溶液C盖满涂膜，染色2min，水洗。干后，镜检。

结果判断

在暗色背景下，抗酸杆菌呈黄绿色或银白色荧光。

应用^[4][5]

用于涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液和结核性胸水改良抗酸染色法的建立与应用评价研究

在传统抗酸染色法的基础上利用玻片离心沉淀仪对其进行改良,建立改良抗酸染色法,并评价其在涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液中的应用价值。

方法:（1）收集痰涂片阴性肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本,标本经4%Na OH按一定比例消化后,利用玻片离心沉淀仪收集其中的结核分枝杆菌,待玻片（实验前经多聚赖氨酸处理）干燥后,进行抗酸染色,建立改良抗酸染色法;

（2）对收集到的灌洗液标本进行改良罗氏培养、直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法检测,对培养阳性患者的所有灌洗液标本用Gene Xpert MTB/RIF系统进行检测,以罗氏培养作为金标准,通过比较不同方法间的差异,探讨改良抗酸染色法在涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液中的诊断价值。

结果:共纳入379例痰涂片阴性肺结核患者,其中32例被剔除,被剔除者中5例因诊断不明、15例因资料丢失、12例因标本培养污染而退出分析。最后347例患者中,74例患者改良罗氏培养阳性,基于74例患者进行统计分析,直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法敏感性分别为16.2%（95%CI:12.3,20.0）（n=12/74）、37.8%（95%CI:32.7,42.9）（n=28/74）、87.8%（95%CI:84.4,91.2）（n=65/74）,改良抗酸染色法较直接涂片法和离心涂片法阳性率高,差异均有统计学意义（P<0.05）。直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法的特异性分别为100%（n=273/273）、100%（n=273/273）和99.6%（n=272/273）。Gene Xpert MTB/RIF系统74例培养阳性患者中,阳性67例,阳性率90.5%。74例灌洗液培养阳性患者中共收集到106份标本,基于此106份标本进行统计分析,改良罗氏培养法、直接涂片法、离心涂片法、Gene Xpert?MTB/RIF系统和改良抗酸染色法阳性率分别为76.4%（81/106）、13.2%（14/106）、34%（48/106）、93.4%（99/106）和91.5%（97/106）。改良抗酸染色法与Gene Xpert?MTB/RIF系统的阳性率相近,但远高于直接涂片法和离心涂片法的阳性率,差异均有统计学意义（P<0.05）。对106份标本同时进行三种抗酸染色,每张染色玻片于油镜下观察300个视野,直接涂片法和离心涂片法的阳性视野数分别为34.4±54.0和38.2±36.8,而改良抗酸染色法的阳性视野数为69.0±67.8,远高于其它两种方法,差异均有统计学意义（P<0.05）。

结论:（1）利用玻片离心沉淀仪成功建立了涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液的改良抗酸染色法;

（3）改良抗酸染色法明显提高了涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌的检出率,对肺结核的诊断价值较大;

（4）改良抗酸染色法简便、快速、经济、高效,值得临床推广应用。背景结核病是单一病原菌引起的感染性疾病中死亡率最高的疾病之一,是人类面临的重大公共卫生和社会问题。

我国约有50%的人感染过结核分枝杆菌,结核性胸膜炎约占所有类型结核病5%,占肺结核病的10%20%,其发病率大约为1.25%,据估算为160万人,青壮年是易感人群,39岁以下的患者占73%,其中约10%30%的结核性胸膜炎患者有胸腔积液出现,是临床上第二大常见的肺外结核病。结核性胸膜炎如不能及时诊断和治疗,则可能造成胸膜增厚、粘连,甚至可引起肺功能下降而丧失劳动能力,因此及时诊治非常重要。

参考文献

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[5]郑立恒.涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液和结核性胸水改良抗酸染色法的建立与应用评价[D].北京市结核病胸部肿瘤研究所,2016.