虎杖苷的药理作用及应用

背景及概述^[1][2]

虎杖根状茎药用，有活血散痰、祛风解毒、消炎止痛、去湿热黄疸、治慢性气管炎、降 低血脂等功效；全草可作兽药，治牛鼓胀症、黄蜂胃病；并可制农药，对防止螟虫、蚜虫等 有效；根状茎和叶都含鞣质，可提制栲胶。根状茎含黄酮类、大黄素、大黄素甲醚、白藜芦醇甙。用根状茎或种子繁殖。白藜芦醇甙是主要存在于虎杖的根茎和根中的天然活性成分。分子式C₂₀H₂₂O₈，分子量：390.40白色针状结晶粉末。易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、碱性溶液，微溶于水。 光稳定性比较差。白藜芦醇甙为二苯乙烯类化合物，具较强生物活性，白藜芦醇甙在植物中分布广，含量较高，目前至少乙经在70 余种植物中发现了白藜芦醇甙。研究表明它对心肌细胞、血管平滑肌细胞、抗血小板聚集、对改善微循环等有显著作用：此外还能够减轻多种因素造成的组织器官损伤，具保护肝细胞，降血脂及抗脂质过氧化等作用。

药理作用及应用^[3]

1. 对心血管系统的作用

1）对心肌细胞的作用

通过PD 对大鼠心肌细胞的研究表明其强心作可能是通过增加单个细胞中的游离钙离子浓度而直接增心肌收缩性；还可能具有增强钙泵或者Na +-Ca2 +交换蛋白的功能，使舒张期胞浆中的Ca2 +能更快、更有效地被肌浆网摄回或排出细胞外。PD 的这种效应，使其在理论上具有比洋地黄类强心甙更优越的强心功能，它不但使心肌收缩更有力，而且使心肌舒张更彻底，从而大大的提高心肌

工作效率。

2）对血管平滑肌细胞(VSMC) 的作用

PD 对大鼠血平滑肌细胞和人脐带动脉平滑肌细胞的影响研究显示：PD 对细胞内钙、pH 有双向调节作用。正常情况下PD 既促进VSMC 外钙离子进入细胞内，又能诱导细胞内钙释放，增加细胞内游高钙；同时升高pH 以提高血管张力。休克时降低细胞内钙浓度及降低细胞内pH 以降低血管张力，使血管扩张；能通过促进细胞外钠离子内流使用细胞去极化来调节血管，其作用可能与钠、钾通道开放有关，并受β 肾上腺素能受体、H2 受体系统及鸟苷酸环化酶系统的反向调节。

3）抗血小板聚集作用

研究发现PD 在体内外都有抑制花生四烯酸(AA) 和二磷酸腺苷(ADP) 诱导的免血小板聚集作用；用比浊法和放射免疫分法测定PD 对兔血小板聚集和血栓素B2 (TXB2) 的影响，证实PD6.7 ～ 107.2μmol/L能明显抑制AA、ADP 诱导的兔血小板聚集和TXB2 产生，抑制率分别为48% ～ 90 %和43% ～ 69 %，TXB2 产生的抑制率分别为50 %～ 78 %和43 %～ 68 %，两抑制率间呈现显著的正相关；研究还证实PD 也能抑制人血小板的聚集。其主要途径是通过前列腺系统。抑制AA、ADP 诱导的血小板聚集以抑制环氧化酶，减少血栓素A2 (TXA2) 为主；抑制凝血酶诱导的血小板聚集除抑制环氧化酶外，还可能与增加前列环素(PGI2) 的释放有关。

4）对微循环的影响

注射PD，可使烧伤大鼠的心输出量恢复至烧伤前的91 %，心室功达100%，全身外周阻力恢复到接近正常，大鼠成活率明显提高；PD 静脉注射能促进微循环中出现动脉血流，减轻烧伤后微血栓形成。

5）对血管内皮损伤性血栓的影响。

PD 可显著减少胰旦白酶创致免本体颈动脉内皮损伤性血栓湿重，PD5mg/kg 和11mg/kg组血栓湿重分别为6.6 ±1.8mg 和4.8 ±1.6mg ，与生理盐水组10.9 ±1.9mg比较均均有显著性差别。

2. 对多种因素等引起的组织器官损伤的保护作用

在大鼠缺血再灌注模型上，梁荣能等观察到PD 可不同程度地降低脑组织的过氧化物脂质含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)活性、降低脑含水量，减轻自由基反应对脑组织的损害，对缺血脑组织有保护作用；并呈量效关系。PD 对家兔肠缺血再灌注时肠外器官肺、肝和肾损伤有保护作用，同时还减少肿瘤坏死因子(TNF) 和溶酶体酶(N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶) 的释放。骆苏芳等采用培养心肌细胞缺糖缺氧损伤和氯丙嗪损伤模型，发现PD 能明显减少心肌细胞损伤时乳酸脱氢酶的释放量。

3. 保肝作用

白藜芦醇甙有保护肝脏，抑制类脂质过氧化物在肝脏堆积的作用。研究PD 对CCL4 损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用显示：它能有效地保护损伤的肝细胞，在1×10-7 ～ 1×10-4mmol/L浓度范围内使细胞存活率显著提高，以1 ×10 -5mmol/L使肝细胞存活率达88.7%，接近于正常培养肝细胞水平。研究表明：PD在一定浓度范围内对过氧化氢所致的小鼠肝细胞氧化损伤有明显的抗氧自由基作用，能提高肝细胞的超氧化物歧化酶(SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -px) 活性，减少GSH 消耗，降低丙二醛(MDA) 含量，抑制一氧化氮合成酶(NOS) 活性，减少一氧化氮(NO) 的生成和氧化作用，从而减轻氧化物对肝细胞的损害，明显降低了肝细胞悬液中ALT 水平，在0.05～2mmol/L范围内其作用有显著的剂量依赖性。

4. 降血脂及抗脂质过氧化作用

研究发现舌下含化白藜芦醇甙2.2mg·kg/d ，连续3 天，可使升高的血清胆固醇，低密度脂蛋白/高密度脂蛋白(LDL/HDL) 比值和红细胞压积恢复至正常，并有降低全血高切变率和低切变率的趋势。通过测定外源自由基影响下的脂质过氧化程度，发现PD能提高脂质膜的稳定性，具显著的抗脂质过氧化作用。

5. 其他作用

有报道0.5 %的PD 有镇咳作用，镇咳率为132.2%，而0.2%磷酸可待因组的镇咳率为181.7%。1%白藜芦醇甙对金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌有抑制作用。

不良反应

肝细胞的研究显示：当4mmol/L剂量的白藜芦醇甙对肝细胞作用后，肝细胞内酶系统(NOS ，aGSH-px ，SOD) 表现一定程度的抑制作用，同时使肝细胞

悬液中ALT 水平有升高趋势，这表明PD 在高浓度时对肝细胞可能存在着潜在性的损伤作用。据报道当给大鼠腹腔注射PD50 ，150 及700mg/ kg ，连续42 天，各组部分动物均有不同程度的肝细胞坏死和腹膜炎症以及骨髓脂肪增生；大剂量组还可引起白细胞减少。

制备^[1,4]

方法1：一种提纯白藜芦醇甙的工艺。该工艺简单易操作，产品:收率高，生产成本低。采用以下技术方案实现的：

①水提：将新鲜虎杖粉碎，加入饱和石灰水提取1.5～2小时，收集提取液，调酸至pH＝7～8，得粗提液；

②大孔树脂吸附：将上述粗提液，通过大孔树脂柱进行饱和吸附，先水洗除杂，再用乙醇洗脱白藜芦醇甙，得白藜芦醇甙洗脱液；

③超滤：将上述白藜芦醇甙洗脱液通过超滤膜除去大分子杂质，得超滤液；

④浓缩：将上述超滤液减压浓缩，回收乙醇，得浸膏；

⑤重结晶：将上述浸膏用乙酸乙酯重结晶3次，即得白色针状结晶产品。

方法2：一种白藜芦醇甙的提取分离精制方法，包括以下步骤：

1）原料预处理：将含白藜芦醇甙的天然植物原料烘干，粉碎；

2）提取：将经步骤（1）处理的原料用有机溶剂回流提取2-4次，每次提取有机溶剂的用量为原料重量的3-6倍，每次提取时间为2-4小时，每次提取后过滤，合并滤液；

3）浓缩：将步骤（2）所得滤液于40-80℃（优选60-75℃）减压浓缩，至体积为原滤液体积的1/8-1/12（优选1/10），得稠浸膏；

4）硅胶拌样：往步骤（3）所得稠浸膏中加入硅胶，硅胶的用量为稠浸膏重量的1.0-1.5倍，混合均匀，烘干至恒重，得拌样的硅胶；

5）洗脱：将步骤（4）所得硅胶装入层析柱，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液；

6）浓缩结晶：将步骤（5）所得洗脱液于温度40-80℃（优选60-75℃）减压浓缩，至体积为原洗脱液体积的1/18-1/22（优选1/20），自然冷却析晶，过滤，得滤饼，烘干，得到白藜芦醇甙。

主要参考资料

[1] CN201010247096.3 一种提纯白藜芦醇甙的工艺

[2] 白藜芦醇与白藜芦醇甙的研究进展

[3] 白藜芦醇甙的生物活性研究

[4] CN201310531365.2 一种白藜芦醇甙的提取分离精制方法