AIF抗体(兔多抗)

背景^[1][2][3]

AIF抗体中的细胞凋亡诱导因子AIF是一种黄素蛋白。细胞凋亡诱导因子通过引起DNA片段化和染色质浓缩参与启动不依赖于胱天蛋白酶的凋亡途径（细胞凋亡的正内在调节剂）。它还可作为NADH氧化酶。另一种AIF功能是调节线粒体膜对细胞凋亡的渗透性。通常它位于线粒体外膜后面，因此与细胞核隔离。然而，当线粒体受损时，它会移动到细胞质和细胞核。

AIF的失活导致胚胎干细胞在生长因子停止后对死亡的抗性，表明其参与凋亡。细胞凋亡诱导因子（AIF）是一种蛋白质，可触发细胞中的染色质浓缩和DNA片段化，从而诱导程序性细胞死亡。发现线粒体AIF蛋白是半胱天冬酶细胞凋亡效应器，可以让细胞核经历细胞凋亡的变化。

当线粒体释放AIF时，触发细胞凋亡的过程开始，AIF通过线粒体膜离开，进入细胞质，最后终止于细胞核，在细胞核中，它向细胞发出信号，凝聚其染色体并分裂其DNA分子，以便为细胞做准备死亡。最近，研究人员发现AIF的活性取决于细胞类型，凋亡损伤及其DNA结合能力。AIF还在线粒体呼吸链和代谢氧化还原反应中起重要作用。

AIF抗体(兔多抗)是通过分子生物学方法构建了重组AIF的表达载体,并诱导实现AIF的大量表达。该重组蛋白以可溶性形式存在,经亲和柱纯化后对家兔进行免疫,得到AIF抗体(兔多抗)。AIF刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体 ，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。多抗一般制备流程：完全抗原的准备→兔子的免疫→ 效价检测和终放→抗体亲和纯化→抗体的浓缩和保存。

临床应用^[5]

在研究肿瘤的抗凋亡机制中AIF抗体可用免疫组化检测样本中AIF的表达水平。凋亡诱导因子(apoptosisinducingfactor, AIF)在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:用免疫印迹法检测 AIF在细胞中的表达量;用免疫组化法检测。

组织标本制成蜡块后,4μm连续切片,60℃烤片过夜。以二甲苯脱蜡,酒精水化后,予PBS冲洗3次,每次5min。用枸橼酸盐高压修复组织抗原,然后用3%过氧化氢溶液室温孵育15min,予PBS冲洗3次,每次5min。用正常兔血清室温封闭15min,滴加AIF一抗(1:200),湿盒内37℃孵育2h后;滴加生物素标记的兔抗山羊IgG二抗,湿盒内37℃孵育15min;再滴加辣根酶标记链霉卵白素,湿盒内37℃孵育15min。

DAB显色,苏木素复染。用PBS代替一抗作空白对照。细胞内见棕褐色颗粒者为 AIF表达阳性细胞。 每张切片在高倍镜下随机选取 10个视野, 按阳性细胞占同类细胞总数的百分比来计算。 ≤5%为阴性(-), 6%-29%为低表达(+), 30% -60%为表达阳性(++), 61%-100%为表达强阳性(+++)。

参考文献

1. PDB:1M6I​;Ye H,Cande C,Stephanou NC,Jiang S,Gurbuxani S,Larochette N,Daugas E,Garrido C,Kroemer G,Wu H(September 2002)."DNA binding is required for the apoptogenic action of apoptosis inducing factor".Nature Structural Biology.9(9):680–4.doi:10.1038/nsb836.PMID12198487.

2. ^Jump up to:abJoza N,Pospisilik JA,Hangen E,Hanada T,Modjtahedi N,Penninger JM,Kroemer G(August 2009)."AIF:not just an apoptosis-inducing factor".Annals of the New York Academy of Sciences.1171:2–11.doi:10.1111/j.1749-6632.2009.04681.x.PMID19723031.

3. ^CandéC,Cohen I,Daugas E,Ravagnan L,Larochette N,Zamzami N,Kroemer G(2002)."Apoptosis-inducing factor(AIF):a novel caspase-independent death effector released from mitochondria".Biochimie.84(2–3):215–22.doi:10.1016/S0300-9084(02)01374-3.PMID12022952.

4. ^Jump up to:abcHangen E,Blomgren K,Bénit P,Kroemer G,Modjtahedi N(May 2010)."Life with or without AIF".Trends in Biochemical Sciences.35(5):278–87.doi:10.1016/j.tibs.2009.12.008.PMID20138767.

5.   凋亡诱导因子(AIF)在胃癌细胞和组织中的表达及意义[J]. 王昌正,李英男,吴本俨,朱鸣,王卫华.现代肿瘤医学 . 2008 (07)