倍硫磷的检测

背景及概述^[1][2]

倍硫磷又名百治屠 (tiguvon)。广谱、低毒有机磷杀虫剂。杀虫作用比敌百虫强，对人、畜毒性较低，无蓄积作用，性质稳定，维持药效长。是杀灭牛皮蝇蚴的特效药，对移行期第二期蚴虫也有效，但蚴虫移行至脊髓阶段要避免用药，否则会引起瘫痪。亦用于杀灭虱、蜱、蝇等。用喷淋或背部浇泼等方法给药。

纯品为无色油状液体，工业品为黄棕色油状液体。商品为50%乳剂，具蒜臭味。对光、热、碱较稳定，可与弱碱性农药混用，但应随配随用。具触杀、胃毒作用，并稍具内吸作用，残效期较长。对高等动物的毒性中等，对大白鼠的口服致死中量为216mg/kg。每亩用50%乳剂100～150g(稀释800～1000倍)对茶叶象甲和绿鳞象甲有较好防治效果。安全间隔期暂定为10～15天。

检测^[3]

倍硫磷(Fenthion)属有机磷杀虫剂，结构为毒性中等，杀 虫谱宽，残效期长，使用广泛。倍硫磷残留对人、畜等具有一定危害性，倍硫磷的大量推广使用，必然会给环境卫生和农产品安全带来危害。因此世界各国都对倍硫磷在农产品中的允许残留量作了严格地规定，我国也不例外。目前倍硫磷检测方法主要是传统的色谱法，该方法对机器依赖性强，成本高，操作复杂，分析时间长，难以满足高通量、快速、在线检测的要求。

CN200710021377.5针对现有色谱仪器技术中的倍硫磷检测方法操作较复杂、检测费用较高、检测效率低下的缺陷，提供倍硫磷ELISA检测方法，为倍硫磷农药残留找到一种既快速准确又简单低廉的超微量检测方法。对倍硫磷农药的残留量进行检测，准确度高、灵敏度高、简单、快速、低廉。检测方法包括：

(1)倍硫磷多克隆抗体制备

采用倍硫磷人工抗原的免疫原“倍硫磷-牛血清白蛋白偶联物”，常规免疫方 法免疫新西兰白兔，制备得到地抗倍硫磷的兔抗血清即为倍硫磷多克隆抗体；

(2)包被

采用倍硫磷人工抗原的包被抗原“倍硫磷-卵清蛋白偶联物”1.2μg/mL在微 量分析板中每孔加50μL，4℃冰箱过夜，倒净，以常规洗涤缓冲液磷酸盐-吐温缓 冲液洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；

(3)封闭

1％明胶作封闭物，微量分析板每孔100μL，37℃反应1小时，倒净，以常规 洗涤缓冲液磷酸盐-吐温缓冲液洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；

(4)加抗体及抗体与待测样品的混合液

用稀释8000倍的倍硫磷抗血清与待测样品和空白抗原抗体反应溶液即常规 磷酸盐-吐温缓冲液等体积充分混合，后以每孔50μL加到微量分析板中，37℃反 应1小时，倒净，以常规洗涤缓冲液磷酸盐-吐温缓冲液洗涤3～6次并倒置、在 吸水纸上拍干；

(5)加酶标二抗

用pH7.4、0.15mol/L的常规洗涤缓冲液磷酸盐-吐温缓冲液将商品化的HRP- 羊抗兔IgG稀释2000倍，微量分析板每孔加50μL，37℃反应1小时，倒净，以 常规洗涤缓冲液磷酸盐-吐温缓冲液洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；

(6)显色

微量分析板每孔加50μL的四甲基联苯胺底物溶液，37℃显色反应10分钟

(7)终止反应并读数

加2mol/L的硫酸，微量分析板每孔加25μL，终止显色反应，酶联仪上450nm 处读出吸光值，空白基质作阳性对照吸光值Bo，待测样品吸光值B；

(8)数据处理

计算出结合率B/Bo及Logit(B/Bo)，

Logit(B/Bo)＝Ln[(B/Bo)/(1-B/Bo)]    公式1

代入如下检测方程：

Logit(B/Bo)＝-0.7575LogC-1.4928    公式2

其中C为微量分析板孔中测得的倍硫磷浓度，通过公式1和公式2可以求得；

X＝n×2C，n为反应前样品被稀释的倍数    公式3

待测样品中以浓度X表示的倍硫磷残留量可通过公式3求得。

上述倍硫磷农药残留量ELISA检测方法中，抗原抗体反应液磷酸盐-吐温缓冲 液中甲醇含量为5％、pH值为7.4、离子强度为0.15mol/L，微量分析板中每孔50μL。公式2可由倍硫磷系列标准浓度的竞争曲线进行校正。

应用^[2]

为广谱低毒有机磷杀虫药，是防治畜禽外寄生虫病的主要药物。通过触杀和胃毒作用方式进入虫体，杀灭宿主体内外寄生虫。杀灭作用比敌百虫强5倍。除了对马胃蝇蚴、家畜胃肠道线虫以及虱、蜱、蚤、蚊、蝇等有杀灭作用外，对牛皮蝇蚴有特效(无论是第三期蚴，还是第二期蚴)，在牛皮蝇产卵期使用，可取得良好的效果。

由于性质稳定，一次用药可维持药效2个月左右。对人、畜的毒性较低，大鼠内服LD50为177～375mg/kg，皮下注射为345～410mg/kg。在体内无蓄积作用，给乳牛用药后，奶中残留量极低，可用于乳牛，但应在用药6小时后再行挤奶。用于杀灭牛皮蝇蚴，除对一般药物有效的第三期蝇蚴有效外，对移行期蝇幼也有效；杀灭家畜体表虱、蜱、蚤、蚊、蝇等。

主要参考资料

[1] 中国茶学辞典

[2] 新编兽药实用手册

[3] CN200710021377.5 农药倍硫磷残留免疫检测方法