溶剂红 25的检测方法

背景及概述^[1]

溶剂红25又叫苏丹红B，属于一种偶氮染料。随着科技的发展，越来越多的染料被应用到各个领域，偶氮类染料就是其中的一种。根据偶氮基数目的多少偶氮染料可分为单偶氮染料、双偶氮染料及多偶氮染料，多出现于直接染料、酸性染料、活性染料、金属络合染料、分散染料、阳离子染料及缩聚染料等合成染料之中，用于多种天然和合成纤维的染色和印花，以及皮毛、塑料、橡胶、陶瓷制品、油脂等的着色。偶氮类染料具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用，不可食用。但因为工业染料的价格比食用色素便宜，很多不法商贩为了节省成本在有色食品中使用偶氮类染料进行染色，使得市场上很多食品的质量得不到保证，如苏丹黑 B 和苏丹红 B 常被不法商贩用于食品染色。

检测方法^[1]

目前除了食品中苏丹红有国家标准检测方法外，其余的偶氮类染料在食品领域中还没有相应的检测方法。偶氮类染料在纺织品等工业产品中的检测方法有薄层色谱法、液相色谱法、气质联用法、气相色谱法等，薄层色谱法只能定性不能准确定量；气质联用法对于一些食品中基质比较复杂样品的抗干扰能力比较差，有时不能准确定性和定量；液相色谱不能完全杜绝假阳性的产生。朱成晶等采用高效液相色谱串联质谱法检测黑色粮谷类食品中苏丹红 B，方法定性、定量准确，有利于加强食品行业的监督，保证黑色粮谷类食品的质量。

1.实验方法

1.1　样品前处理方法

称取 2.00g样品 (精确至0.001g) 置于 50 mL塑料离心管中，加入10 mL 正己烷饱和乙腈漩涡混匀后超声提取 20 min，以4000 r/min 离心3 min；上清液转移到 50 mL 磨口的玻璃离心管中，残渣用10 mL正己烷饱和乙腈重复提取一次，离心合并两次的提取液，用乙腈饱和正己烷 5 mL 去除油脂，以3 000r/min 离心3 min，弃去上层正己烷层，乙腈层于40℃浓缩至干。用5 mL正己烷溶解后过 Florisil固相萃取柱，用10 mL 正己烷乙酸乙酯混合溶液洗脱，氮气吹干， 用 1 mL 乙腈水溶液溶解残渣，过 0.22μm 的滤膜，待测。

1.2　系列标准溶液配制

准确量取苏丹红 B标准储备液适量， 用乙腈配制成 200 ng/mL 的标准使用液。量取适量标准使用液，用乙腈水溶液配制成 5，10，20，40，80，100 ng／mL 系列标准工作溶液，分别进样 20μL，进行分析。

2　结果与讨论

2．1　波长选择

配制苏丹红 B 标准溶液，用紫外分光光度计进行全波长扫描，结果显示苏丹红 B 的吸收波长为 600 nm 时，可以得到的灵敏度，因此确定检测波长为 600 nm。

2．2　色谱柱选择

对几种不同规格 (250 mm×4.6 mm，5μm；150 mm×4.6 mm，5μm ； 100 mm×4.6 mm， 3.5μm， 编号分别为 1#，2#， 3#，Agilent 公司 ) 的 C18 柱进行对照试验，结果表明： 1# 柱在保证分离度的情况下，出峰时间较迟，峰形较宽；2# 柱出锋时间早但分离度不好；3# 柱出峰时间适中，分离度良好，并且可以得到满意的峰形。因此选择 Agilent 100mm×4.6 mm，3.5 μm C18 色谱柱，柱温为 40℃。

2． 3　流动相的选择

分别对甲醇、乙腈、甲酸铵、乙酸铵、甲酸等流动相进行试验，试验结果发现，在使用甲醇作为流动相时有机相出峰迟，峰形宽，压力高；使用乙腈甲酸铵 -甲酸水溶液和乙腈乙酸铵-甲酸水溶液为流动相时，峰形宽，不对称且有拖尾；以乙腈-0.1% 甲酸水溶液 (体积比为90∶10) 作为流动相时，可以得到满意的峰形，具有合适的分离度和出峰时间。图1苏丹红 B 标准溶液的液相色谱分离图，图 2 为质谱总离子流图和选择离子监测图。苏丹红 B 的子离子质核比为 91.1，106，156。

2．4　样品提取与净化条件选择

样品处理时如果使用乙腈提取，正己烷去油回收率会因为乙腈和正己烷的互溶而降低，因此选择用正己烷饱和的乙腈提取，并且去油时也采用乙腈饱和的正己烷。采用正己烷-乙酸乙酯混合溶液洗脱时，若乙酸乙酯含量过高，净化效果较差。经过试验比较，采用正己烷-乙酸乙酯 (体积比为 8∶2) 提取样品，用量为 10 mL 时净化效果。

主要参考资料

[1]朱成晶,朱鸭梅,李稳,刘佩佩,李新丽.LC–MS/MS法检测黑色粮谷类食品中的苏丹黑B和苏丹红B[J].化学分析计量,2015,24(04):58-61.