尿酸酶_肾脏病用药

尿酸酶又称尿酸氧化酶、环拉酸，由黑曲霉（Aspergillus niger），黄曲霉等发酵液提取而得。常温下为灰白色或褐绿色结晶或光亮透明片状物。分子量9300。几乎不溶于水，微溶于碱性缓冲液。PH值6.3，酶活性受氰化物抑制。尿酸酶能催化尿酸迅速氧化，最终生成尿囊酸。可用于治疗尿酸结石及肾功能衰竭所致的高尿酸血症。也用于测定血清及尿中的尿酸量。

【药性与应用】
尿酸酶能催化尿酸迅速氧化变成尿囊酸，不再被肾小管重吸收而排泄，从而降低血浆中尿酸含量。用于不能口服抑制尿酸生成剂的病人。对尿酸结石、结节性痛风、白血病、肾衰竭等因素引起的高尿酸血症均有良效。
肌内注射或静脉注射： 1000单位/d。可根据病情适当调整剂量。

【注意与禁忌】
可有全身荨麻疹样瘙痒，肌内注射部位发红。为异性蛋白制剂，易引起过敏反应。

尿酸是嘌呤分解代谢的最终产物。由肾脏随尿液排出体外。健康成人体内尿酸含量约为1.1g，其中约15%存在于血液中，血液中尿酸经肾小球过滤后，大部分由肾小管重吸收。尿酸是血浆中非蛋白氮重要成分之一，在严重肾脏损害时，血中尿酸可显著升高。而轻度受损时变化不大。故血尿酸测定是诊断肾重度受损的敏感指标，参考数值：男性：208-428 女性：155-357(μmol/L)。

屎酸是鸟类、爬行类和包括人在内的灵长类动物体内嘌呤代谢的终产物，因为在这些动物体内缺乏以分子氧为受体催化尿酸进一步分解为尿囊索、co2和H2O2的屎酸酶·尿酸作为人体嘌呤代谢的终产物经肾脏排泄，当尿酸生成超过肾脏捧泄刊，例如富嘌呤食物掇入过多以及白血病和淋巴瘤及其化疗过程所引起的嘌呤代谢剧增；或者当肾脏处于病理状态时使正常产生的尿酸捧泄受阻，这两种状况都会造成血浆尿酸显著升高，形成高尿酸血症。

【临床意义】
(1)血尿酸增高：
①急慢性肾炎血尿酸明显增高，且较BUN、Cr更显著，出现更早。其他肾病晚期，如肾结核、肾盂肾炎、肾积水等血尿酸亦增高。因肾外因素影响较大，故其升高程度并不与肾功能受损程度成正比
②痛风，由核蛋白及嘌呤代谢紊乱所致，血尿酸>595μmol/L。
③白血病，多发性骨髓瘤，真性红细胞增多症等因核酸代谢分解增加使血尿酸增加。
④其他：氯仿、四氯化碳、铅中毒、子痫、妊娠反应、剧烈运动等。
(2)血尿酸减少：较少见，见于恶性贫血、乳糜泻等。

【痛风和高尿酸血症】
痛风的生化特征是高尿酸血症，临床则以严重的急性关节炎发作为其特色。未治病例可按以下四期发展：(1)无症状性高尿酸血症，少数发展为急性痛风;(2)急性痛风性关节炎，常为单关节性，但亦可为多关节受累;(3)无症状间歇期;(4)慢性砂砾性痛风伴慢性关节炎(30～40%痛风病人发生痛风石)。如能及早诊断，及时给予适当治疗，痛风常能制止，破坏性关节损害及尿路结石等合并症亦可防止。

有些痛风病人发生间质性肾炎。但肾脏病变源出血管病、高血压、铅中毒者实更常见，还可能是独立的肾脏疾患。肾结石可能是由于尿酸排出增多引起的。但以降尿酸药物治疗，不能使进行性肾功能不全好转，因为它与高尿酸血症是无关的(Beck，1986)。

作为急性痛风性关节炎临床征象内在基础的高尿酸血症，常有原发和继发之分。原发性高尿酸血症可由于尿酸生成过多或肾脏对尿酸排出的减少，或二者兼有。但尿酸产生过多的机理，多数病例仍属不明。次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(hypoxanthine-guanine-phosphoribosyl transferase)缺乏或磷酸核糖基焦磷酸合成酶(phosphoribosyl-pyrophosphate syn-thetase)活力增高，都可使5-磷酸核糖-1-焦磷酸(5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate)水平增高，从而促使尿酸合成增多(Rodnan等，1983)。

肾脏对尿酸的清除障碍，比尿酸生成过多常见得多。很多痛风病人肾脏排泄尿酸的机能都有缺陷，而这种排泄机能的完整，则有赖于滤过、回收、分泌和分泌后回收四步模式的完整。原发性高尿酸血症的最可能机制是肾小管分泌减少或其回收增多。

继发性高尿酸血症则是在另一疾病过程中发生的，或为某种外在性沉积过程的结果(如药物治疗)。像原发性高尿酸血症一样，继发性高尿酸血症的内在病因也不外生成过多及肾排出减少。如骨髓增生性病变时，骨髓活动亢进，来自细胞和核酸的尿酸生成与周转都增多，致使血中尿酸浓度增高。利尿治疗及长期饮酒，可使肾脏对尿酸的排出削弱，血中尿酸浓度亦可增高。

男子和绝经期后妇女以尿酸酶测定的血清尿酸浓度超逾7mg/dl时，一般即有急性痛风的症状发生。因为血清尿酸浓度达此水平，就会促使尿酸一钠晶体在滑膜组织和滑液中沉淀下来，终而导致急性炎症的发作。此中确切机理仍未尽悉，但知与此过程有关的改变涉及白细胞对晶体的吞噬，激肽释放酶和补体系统活化，白细胞内溶酶体破裂，以及最终整个细胞解体，释出溶酶体酶进入滑液(Kelley和Palella，1987)。

痛风在妇女中颇为稀见，已报道病例中，仅占5.2%。利尿疗法、肾功能不全和绝经期后，皆与痛风有明显关连。除此以外，包括血清尿酸水平在内的各方面表现，皆与男子痛风相似(Krane，1986;Lally等，1986)。

很多病变都伴有高尿酸血症，急性痛风症状，可与另几种类型的关节炎相似。检出痛风石或由滑液白细胞中检出尿酸一钠结晶，即可诊断痛风。再者，根据高尿酸血症、单关节受累并有发作间歇期的关节炎以及秋水仙碱治疗立即奏效等表现，一般亦可与其他类似病变鉴别开来。

【血清尿酸-尿酸酶紫外线法】
尿酸在尿酸酶催化下氧化生成尿囊素，尿酸在293nm处有特定的吸收峰，随着尿酸的不断被氧化，吸光度也随之成比例降低。反应式如下：
尿酸--（尿酸酶）--尿囊素+H2O2+CO2↑
用生化自动分析仪或带有293nm波长及具有恒温装置的分光光度计检测，温度30℃，反应时间3～5min，样品与尿酸酶溶液比例为1∶30。
正常参考值：90～420μmol/L。临床意义同酶耦联测定法。

【聚乙二醇化尿酸酶的制备、纯化及性质研究】
尿酸酶分解嘌呤代谢最终产物尿酸，生成水溶性更强，更易分解的尿囊素。当尿酸在血液中沉积，引起肾衰竭以及痛风等疾病。尿酸酶针对禁忌常规治疗和常规疗法无效的患者，能快速降低血液中尿酸盐的含量。但作为外源蛋白有较高抗原性，影响了尿酸酶的活性。需要在尿酸酶分子表面结合一种水溶性高聚物，从而降低尿酸酶的抗原性，延长它在体内的半衰期。 蛋白质PEG修饰技术在过去的20年中得到了快速发展，已有多篇文献报道了经PEG修饰的蛋白质药物降低了免疫原性、提高了稳定性、延长了半衰期，并用于临床治疗各种疾病。本文研究尿酸酶聚乙二醇修饰的条件、纯化方法以及修饰产物生物学活性和酶动力学性质的改变。 通过对温度、pH、尿酸酶浓度、PEG和尿酸酶质量比等条件的筛选，确定pH8.5，4℃，尿酸酶与PEG_2-NHS质量比1：10，尿酸酶浓度2mg／mL为修饰条件，10min内反应完全。 凝胶过滤层析测定尿酸酶分子量为70kD，结合还原和非还原性SDS-PAGE判断尿酸酶由两条分子量30kD的亚基通过二硫键组合而成。制备型PAGE电泳分离纯化后，尿酸酶和PEG-尿酸酶通过SDS-PAGE电泳检测均为单一条带。收集凝胶，回收反应混合液总活性的46.7％，目标产物130kD的PEG-尿酸酶占12％。 尿酸酶最适温度和pH分别为40℃、pH8.5，经PEG修饰后，最适温度和pH变为35℃、pH8.0。修饰前后的尿酸酶在pH7.5-9.0范围内，温度40℃以下都比较稳定，PEG-尿酸酶在各个pH范围内都比尿酸酶相对稳定，修饰后尿酸酶的热稳定性也有所提高。在最适条件下，测定尿酸酶和PEG-尿酸酶Km分别为16.62×10~(-5)mol／L、17.8×10~(-5)mol／L。测定了尿酸酶和PEG-尿酸酶Km随pH、温度改变的变化情况，Km均高于最适条件得出的结果。 采用TNBS法测定尿酸酶的氨基修饰率为16.7％。修饰后的PEG-尿酸酶抗胰蛋白酶水解能力明显高于未修饰的尿酸酶，在胰蛋白酶作用40min后仍保留原活性的20％，而尿酸酶在胰蛋白酶作用30min后活性就完全丧失。

屎酸酶是一种新型的降尿酸药物，它以促进尿酸分解为药物特征。因此从药物生产来说，对屎酸酶的需要量也很大．由此可知，尿酸酶实在是一种很重要的医药用酶，做好相关产品的开发，具有较高的社会经济敬益。