L-异亮氨酸甲酯盐酸盐的检测方法及含量测定

背景及概述^[1][2]

L-异亮氨酸甲酯是L-异亮氨酸的保护形式。L-异亮氨酸被归类为必需氨基酸，学名2-氨基-3-甲基戊酸，疏水性氨基酸之一。L-异亮氨酸是组成蛋白质的20种氨基酸的一种支链氨基酸，有两个不对称碳原子，是哺乳动物的必需氨基酸和生酮氨基酸，并且也是大鼠中膀胱癌的肿瘤启动子。L-异亮氨酸甲酯盐酸盐是一种生化试剂，也可以用作医药中间体，是白色细粉末晶体。

检测方法^[1]

L-异亮氨酸甲酯盐酸盐常规的检测方法是银量法，即在L-异亮氨酸甲酯盐酸盐溶液中，加入指示剂铬酸钾，用硝酸银标准溶液滴定，氯化银先沉淀，当砖红色的铬酸银沉淀生成时，表明Cl离子已被定量沉淀，指示终点已经到达。但是用铬酸钾指示剂法，必须在近中性或弱碱性溶液(pH6.5～10.5)中进行滴定，若在酸性溶液中进行，CrO4^2- 与H⁺结合，降低CrO4^2-浓度，在等当点时不能立即生成铬酸银沉淀，此法也不 能在碱性溶液中进行，因银离子氢氧根离子生成氧化银沉淀；而且此法是依靠指示剂颜色变化来指示滴定终点，如果待测溶液有颜色或浑浊时，终点的指示就比较困难，误差大。

应用^[1]

L-异亮氨酸甲酯盐酸盐是一种生化试剂，也可以用作医药中间体。

含量测定^[1][2]

方法1：一种 L-异亮氨酸甲酯盐酸盐含量的检测方法，属于电位滴定法，是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点 的方法，进行电位滴定时，被测溶液中插入一个参比电极，一个指示电极组成工作电池。随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，被测离子浓度不断变化，指示电极的电位也相应地变化。在等当点附近发生电位的突跃。因此测量工作电池电 动势的变化，可确定滴定终点。所述方法包括如下步骤：

(1)配制供试品：精密称取L-异亮氨酸甲酯盐酸盐0.5g，加无水甲酸5mL 溶解后移入100mL容量瓶中，然后加水至刻度线即得供试品；

(2)检测：将步骤(1)所配的供试品用硝酸银标准溶液进行滴定，用甘汞 电极作为参比电极，用银电极作为指示电极；当电极电位发生突跃时，则滴定到达终点，记录硝酸银标准溶液用量并计算得出含量结果。所述硝酸银标准溶液的浓度为0.01mol/L。与现有技术相比，优点是能准确判断滴定终点、误差小，还能实现自动化和连续测定。

方法2：有研究采用衍生化为辅助手段，建立高效液相色谱法测定质L-异亮氨酸甲酯盐酸盐含量的方法。采用岛津VP-ODS C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；以乙酸钠缓冲液(pH 7.2)-甲醇-乙腈(20∶45∶30)为流动相，流速为1.0 mL/min；检测波长为262 nm；柱温为40℃。采用9-芴基甲酰氯为衍生化试剂，考察衍生化试剂浓度，反应静置时间，超声时间等衍生化条件，确定衍生化的方法并进行方法学验证。结果显示衍生化反应条件为：衍生化试剂浓度10 mg/mL，反应静置时间20 min，超声10 s。经方法学验证，L-异亮氨酸甲酯盐酸盐在15～75μg/mL范围内线性良好，其平均回收率为92.943%，RSD为4.965%，溶液在5 h内稳定性。结论：该方法简便、快速、耐受性好，符合有关物质方法学验证要求，可用于杂质L-异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量测定。

主要参考资料

[1] CN201010184848.6 一种L-异亮氨酸甲酯盐酸盐含量的检测方法

[2] 殷静， 常艳. 高效液相色谱法测定 L-缬氨酸甲酯盐酸盐中 L-异亮氨酸甲酯盐酸盐[J]. 中国新药杂志， 2012， 21(18)： 2137-2140.