D-葡萄糖-6-磷酸二钠在生化研究中的应用

发布日期:2020/10/25 9:01:40

背景及概述^[1][2]

D-葡萄糖-6-磷酸二钠是一种有机物质，其主要用于生化研究，测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶的底物。如果吸入D-葡萄糖-6-磷酸二钠，请将患者移到新鲜空气处；如果皮肤接触，应脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤，如有不适感，就医；如果眼晴接触，应分开眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗，并立即就医；如果食入，立即漱口，禁止催吐，应立即就医。对保护施救者的忠告如下：将患者转移到安全的场所，咨询医生，如果条件允许请出示此化学品安全技术说明书给到现场的医生看。若泄露，小量泄漏尽可能将泄漏液体收集在可密闭的容器中，用沙土、活性炭或其它惰性材料吸收，并转移至安全场所，禁止冲入下水道；若大量泄漏，构筑围堤或挖坑收容，封闭排水管道，用泡沫覆盖，抑制蒸发，用防爆泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。

结构

应用^[1-2]

D-葡萄糖-6-磷酸二钠主要用于生化研究。

测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶的底物。其应用举例如下：

1.用于表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定。表小檗碱是黄连中一种重要的异喹啉类生物碱。研究表明表小檗碱具有较强的抗氧化活性，能够抑制醛糖还原酶，降血糖，对抗糖尿病潜在并发，其作用强于小檗碱。检测过程中所使用的D-葡萄糖-6-磷酸二钠和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶均购于北京拜耳迪生物技术有限公司( Sigma 公司分装)。D-葡萄糖-6-磷酸二钠主要用于检测过程中探针药物肝微粒体温孵：将各探针药物与RLM 于 37 ℃ 水浴中预温孵 5 min，加入 NADPH 发生系统( 终浓度含 1 mmol/L NADPNa2，20 mmol /LD-葡萄糖-6-磷酸二钠（G-6-P），2 U /L G-6-PDH，20 mmol/L MgCl2 ) ，用 0.15 mol/L的 KCl 缓冲液( pH 7.4) 定容使整个温孵体系终体积为 0.4 mL( 含有美托洛尔 20 μmol/L、氨苯砜25 μmol/L、非那西丁 25 μmol/L、氯唑沙宗 25 μmol/L、甲苯磺丁脲 25 μmol/L ) 和 1 g/L蛋白，于37 ℃水浴中均匀振荡40 min。取出体外温孵样品放入冰浴中，按1∶ 3 加入冰冷的甲醇终止反应，同时加入内标物 0.06 g/L五味子醇甲20 μL，振摇 30 s，于 4 ℃，1 万× g 离心 20 min。吸取上清夜氮气吹干，甲醇( 400 μL) 复容，4 ℃，1 万× g，离心20 min，取上清进样20 μL，进行 HPLC 分析，每个样本均做3 个重复。

2. 用于测定吴茱萸次碱对 5 种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用。

黄连和吴茱萸配伍使用已有悠久历史，二药一寒一热，相反相成。黄连主要成分为异喹啉型生物碱，包括黄连碱（COP）、表小檗碱（EPI）、小檗碱（BER）、巴马汀（PAL）、药根碱（JAT）等，吴茱萸次碱（RUT）为吴茱萸的主要成分。近年来的研究发现，黄连与吴茱萸成分间存在明显的药动学相互作用。黄连生物碱主要在肝脏代谢，吴茱萸成分中的 RUT 能选择性抑制大鼠和人肝微粒体酶的活性，吴茱萸成分对 BER 的大鼠肝代谢具有抑制作用。由于不同黄连生物碱存在明显肠吸收的选择性，因此推测吴茱萸对黄连各生物碱肝代谢应存在抑制作用并具有选择性。有实验采用大鼠体外肝微粒体温孵代谢模型，通过获得半数抑制浓度（IC50）及抑制常数（Ki）值，判断 RUT 对黄连中 5 种生物碱成分（COP、EPI、BER、PAL、JAT）是否具有体外代谢性抑制作用及强弱程度，比较 RUT 对这 5 种生物碱抑制作用的差异性。D-葡萄糖-6-磷酸二钠（G-6-P）主要用于检测过程中NADPH-发生系统的制备：精密称取 NADPNa2、G-6-P、G-6-PDH、MgCl2 适量，加水定量溶解，即得含 2 mmol/L NADPNa2、 20 mmol/L G-6-P、4 U/L G-6-PDH、40 mmol/L MgCl2 的 NADPH-发生系统。