HSPA4 Rabbit Monoclonal Antibody

背景^[1][2]

热休克蛋白是一类帮助新合成的蛋白正确折叠的分子伴侣，以往的研究已经证明了热休克蛋白70-1 /70-3 和40( HSP70-1 /HSP70-3 和HSP40) 的心肌保护作用。HSPA4 是HSP70 的核苷酸交换因子。德国科学家Belal A．Mohamed 等发现，在压力超负荷和容量超负荷模型小鼠中，只有压力超负荷小鼠出现HSPA4 表达上调。

有研究检测了主动脉狭窄患者和正常人心脏中HSPA4 的表达量，发现主动脉狭窄患者HSPA4 蛋白表达增高，这提示后负荷增加是导致HSPA4 在心脏中表达升高的主要因素。免疫荧光证实HSPA4 主要表达在小鼠心肌胞质中。研究人员还比较2、12 和24周龄野生小鼠和Hspa4 KO 小鼠心脏结构和功能的变化，发现Hspa4 KO 小鼠心重/体重比增加，心肌细胞直径增大，心肌肥大和纤维化的标志物表达上升，但收缩功能尚无明显改变。

研究人员给KO 和WT 小鼠行主动脉缩窄术( TAC)，结果显示Hspa4 KO 小鼠心肌肥大和纤维化更加严重，这些结果提示HSPA4 缺陷会加重病理性心肌肥大和压力超负荷后的心肌重构。HSPA4 在控制心肌细胞蛋白质质量、维持蛋白折叠和稳态中的重要作用。单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经多年研究，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。

但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难，直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系，得到了稳定的兔-兔杂交瘤，才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。近年兔单克隆抗体技术日臻完善，目前商品化的兔单抗已达数千种。

HSPA4兔单克隆抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。HSPA4兔单克隆抗体可用于WB、IF、 IHC、ICC、 FC，不同应用浓度不同。如果HSPA4兔单克隆抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。

回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

应用^[1]

1. 在生物标记物开发中的应用

兔单克隆抗体包括HSPA4兔单克隆抗体广泛用于生命科学研究的各个领域，尤其在免疫组织化学以及检测蛋白的转译后修饰方面具有独特优势。至今已有100多种兔单克隆抗体开发用于癌症的IHC临床诊断与研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC诊断试剂盒。在蛋白修饰研究领域，如蛋白的磷酸化，在与疾病相关的蛋白质信号通路中起到了至关重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔单克隆抗体可以非常清楚地显示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多种磷酸化特异性的兔单克隆抗体面世。

2. 在治疗抗体药物开发中的应用

临床使用的大多数治疗用抗体均需经体外亲和力成熟这一步骤，以提高抗体的亲和力。这一过程常需8至12个月，最终亲和力在纳摩尔级(10-9 mol/L)。兔单抗不需使用体外亲和力成熟，就能达到10-11至10-13 mol/L。这种高亲和力不仅减少抗体的临床使用量，还能减少由于使用大量抗体带来的副作用。但这种高亲和力的优势还需在动物和临床试验中进一步证实。

另外，与鼠单抗的人源化相比，兔单克隆抗体的人源化更容易。因为，兔单克隆抗体主要由一种重链及轻链基因构成，通过分析大量的兔单克隆抗体序列发现，兔与人的抗体同源性更高，约60%～76%，而小鼠与人的抗体同源性略低，为57%～72%，说明用兔单克隆抗体开发药物前景更广阔。

主要参考资料

[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品, 2012, 14(9): 373-376.

[2] 谢玥, 吴立玲. 靶向破坏 Hspa4 基因可导致心肌肥大和纤维化[J]. 生理科学进展, 2013, 44(3): 168-168.