磷酸化HSP27 (pSer82)兔单克隆抗体

背景^[1][2]

单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经多年研究，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难，直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系，得到了稳定的兔-兔杂交瘤，才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。

近年兔单克隆抗体技术日臻完善，目前商品化的兔单抗已达数千种。survivin 作为凋亡抑制蛋白家族中独特一员，参与细胞的分裂和增殖过程调节，在细胞凋亡抑制中起重要作用。鉴于组织分布的特点及与多数肿瘤相对关联性，其研究为肿瘤临床诊断、治疗提供了有力支持。

热休克蛋白（heat shock protein, HSP）是在各种应激因素特别是高温环境因素的诱导下产生的一类蛋白质，广泛存在于人、动物、微生物和植物的细胞中，能提高细胞对抗各种损伤因素的能力，并促进细胞对各种刺激所造成的损伤进行自身修复，具有重要的生物学功能，并与肿瘤细胞的增殖密切相关，HSPs- 肽复合物通过活化体内多个CTL 克隆，可望特异杀伤同一种肿瘤内所有肿瘤细胞，打破免疫耐受，消灭残存瘤组织，克服目前肿瘤中难以解决的抗原多变性及细胞异质性等困难。

根据其分子量的不同，可分为HSP110，HSP90，HSP70，HSP60 及小分子热休克蛋白亚家族。其中小分子热休克蛋白（small heat shock protein, sHSP）几乎存在于所有生物体中，具有保守的α 晶体蛋白结构域，在细胞内发挥着不同的功能。

热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）又称热休克蛋白B1（heat shock protein B1, HSPB1）是小分子热休克蛋白家族的重要成员，普遍表达于多种组织细胞，以心肌细胞和神经元等终末分化细胞含量最为丰富，可通过提高线粒体氧化还原状态、结合Fas 死亡域相关蛋白Daxx 和Cytc、抑制caspase 级联激活等机制抑制细胞凋亡，参与调节多种细胞的增殖、分化和细胞凋亡的信号转导，保护细胞免受各种应激因素的损伤。近年来HSP27/HSPB1 与各种临床疾病特别是肿瘤的关系日益受到重视。

 磷酸化HSP27 (pSer82)兔单克隆抗体可用于免疫组织化学技术如免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。原理是抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。

由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。磷酸化HSP27 (pSer82)兔单克隆抗体于-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。如果磷酸化HSP27 (pSer82)兔单克隆抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。

回收的磷酸化HSP27 (pSer82)兔单克隆抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

主要参考资料

[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品，2012，14(9)： 373-376.

[2] 田方艳, 曹辉, 张培湘, 等. 小鼠 HSP27/HSPB1 单克隆抗体的制备和鉴定[J]. 肿瘤药学, 2013 (1): 26-29.