HtrA2/Omi兔单克隆抗体的应用

背景^[1][2]

单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经多年研究，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难，直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系，得到了稳定的兔-兔杂交瘤，才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。

近年兔单克隆抗体技术日臻完善，目前商品化的兔单抗已达数千种。HtrA2/Omi是一种寡聚丝氨酸蛋白酶，存在于大部分的正常组织器官中。在最初的研究中发现，当细胞受到凋亡刺激时，HtrA2 /Omi可由线粒体膜间隙释放进入细胞质中，接着出现大量的细胞凋亡性死亡，这些现象表明HtrA2/Omi与细胞死亡之间有着密切的关系。

随着近年来研究的不断深入，人们又惊奇地发现，它不仅出现在细胞凋亡的进程中，当细胞面对各种应激环境时，HtrA2/Omi活性和浓度也会上调，以增加细胞对刺激的耐受能力，使细胞得以生存下来。这是一对看似互相矛盾的事实，却更体现出HtrA2/Omi在细胞存亡调节中的重要地位。HtrA2/Omi兔单克隆抗体是可用于检测总HtrA2/Omi蛋白的内源性水平，反应物种可为人类，小鼠，大鼠。

有试验曾采用HtrA2/Omi兔单克隆抗体研究HAX-1和OmiHtrA2在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮质中的表达及参附注射液的保护作用，结果显示HAX-1和OmiHtrA2在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮质中表达水平升高，具有保护作用。

应用

1. 在生物标记物开发中的应用

兔单克隆抗体包括HtrA2/Omi兔单克隆抗体广泛用于生命科学研究的各个领域，尤其在免疫组织化学以及检测蛋白的转译后修饰方面具有独特优势。至今已有100多种兔单克隆抗体开发用于癌症的IHC临床诊断与研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC诊断试剂盒。在蛋白修饰研究领域，如蛋白的磷酸化，在与疾病相关的蛋白质信号通路中起到了至关重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔单克隆抗体可以非常清楚地显示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多种磷酸化特异性的兔单克隆抗体面世。

2. 在治疗抗体药物开发中的应用

临床使用的大多数治疗用抗体均需经体外亲和力成熟这一步骤，以提高抗体的亲和力。这一过程常需8至12个月，最终亲和力在纳摩尔级(10-9 mol/L)。兔单抗不需使用体外亲和力成熟，就能达到10-11至10-13 mol/L。这种高亲和力不仅减少抗体的临床使用量，还能减少由于使用大量抗体带来的副作用。但这种高亲和力的优势还需在动物和临床试验中进一步证实。

另外，与鼠单抗的人源化相比，兔单克隆抗体的人源化更容易。因为，兔单克隆抗体主要由一种重链及轻链基因构成，通过分析大量的兔单克隆抗体序列发现，兔与人的抗体同源性更高，约60%～76%，而小鼠与人的抗体同源性略低，为57%～72%，说明用兔单克隆抗体开发药物前景更广阔。

主要参考资料

[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品，2012，14(9)： 373-376. 

[2] 朱冠南. HAX-1 和 OMI/HTRA2 在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮质中的表达及参附注射液的保护作用[J]. 2011.