Caspase-3抗体的应用

背景^[1][2]

细胞凋亡 (apoptosis) 是细胞为维持内环境稳定，更好地适应生存环境而主动 形成的一种自我死亡过程，它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。大量的光镜及超 微结构的研究分析证明哺乳动物附植前的胚胎就可以观察到细胞凋亡的发生，胚胎细胞的 凋亡有利于胚胎去除发育异常的细胞，但研究结果发现细胞凋亡与胚胎发育的停滞相关， 超出某一程度的凋亡不利于胚胎的发育。

因此研究着床前胚胎细胞的凋亡将有助于正确理 解胚胎的发育过程，改进体外培养体系，提高胚胎质量，解决哺乳动物胚胎流产率高的问 题。半胱天冬酶家族( Caspase) 能够启动和维持细胞凋亡，而其成员Caspase-3 是该细胞凋亡通路下游最重要的凋亡蛋白酶，其表达量直接反映细胞凋亡程度。

Caspase-3 是位于哺乳动物细胞凋亡通路下游关键的死亡蛋白酶。正常情况下，胞质中的Caspase-3 以无活性的酶原形存在，细胞凋亡信号的出现可导致Caspase-3 裂解、活化，活化的Caspase-3 又进一步导致蛋白酶级联切割放大，最终使细胞走向死亡〔2， 12〕。

因此Caspase-3 表达量可以直接反映细胞凋亡程度。细胞凋亡程度Caspase-3是细胞凋亡过程中最关键的执行分子(key executioner)之一，可以剪切细胞凋亡过程中的许多关键蛋白，例如PARP。

Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之间及Asp175和Ser176之间进行剪切，产生有活性的17kD肽段。Caspase-3抗体可以识别全长的Caspase-3(35kD)，也可以识别Caspase-3被剪切后产生的17kD片断。未发现和其它Caspase家族蛋白有交叉反应。

应用^[2]

Caspase-3抗体可用于制备AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒 。所述试剂盒包括：0.6-0.8%BSA的PBS缓冲液，2.5-4%多聚甲醛的PBS缓冲液，含0.6-0.8%Triton-X-100和0.06-0.08%吐温40的PBS缓冲液，兔抗caspase-3抗体，带有Alexa-Fluor488绿色荧光素标记的山羊抗兔IgG二抗，18-22μM-DAPI的PBS缓冲液。

所述兔抗caspase-3抗体是用合成的caspase-3蛋白中靠近Asp175的氨基末端残基的多肽抗原免疫兔子获得的多克隆抗体；兔抗caspase-3抗体按1:600的体积比稀释于封闭液中。所述山羊抗兔IgG二抗按1:600的体积比稀释于封闭液中；其中，所述封闭液为含10%山羊血清和0.06-0.08%吐温40的PBS液。上述试剂盒能对凋亡细胞进行准确定性和定量检测，灵敏度高、特异性强，操作简单，重复性好，效率高。

主要参考资料

[1] 孙缦利, 邓海峰, 马玲, 等. 美满霉素对阿尔茨海默病大鼠前额叶皮层 CRMP-2 和 Caspase-3 表达的影响[J]. 中国老年学杂志, 2018, 38(17): 4236-4239. 

[2] CN201610432720.4 AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒