尿酸(UA)含量测定试剂盒 可见分光光度法的应用

背景^[1-3]

尿酸(UA)含量测定试剂盒可见分光光度法是利用505nm下尿酸酶催化尿酸前后吸光值的降低来计算尿酸的含量。

尿酸为嘌呤代谢的终末产物，嘌呤代谢紊乱、能量代谢异常及肾脏对尿酸的排泄障碍等均可引起血浆尿酸水平升高或降低，进而导致多种疾病如通风、肾病、心血管疾病的发生，尿酸含量的测定在临床诊断中有着重要的指导意义。

尿酸(UA)含量测定试剂盒

操作步骤:

一、样本的制备

（1）组织样品的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000 rpm 4℃离心10分钟，取上清待测。

（2）血清（浆）或尿液可直接测定。

二、测定操作表

1、紫外分光光度计或者酶标仪预热30min，调波长293nm，蒸馏水调零。

2、试剂一37℃预热10min。

3、向1ml石英比色皿中加入500μL的样本，再加入500μL的试剂一，立即测量293nm下的吸光度A 0，37℃保温，10min再测定一次，记为A 1，计算ΔA=A 1-A0。

三、UA含量计算公式

（1）按血清（浆）或尿液计算

UA含量（μmol/mL血清（浆）或尿液）=∆A÷（Ɛ×d）×V反总÷V样=∆A÷6.02

（2）按样本鲜重计算

UA含量（μg/g鲜重）=∆A÷Ɛ÷d×V反总÷（W÷V提×V样）×M=27.9×∆A÷W

（3）按样本蛋白浓度计算

UA含量（μg/prot）=∆A÷Ɛ÷d×V反总÷（Cpr×V样）×M=27.9×∆A÷Cpr

应用^[4][5]

用于人血浆中尿酸及嘌呤物质的含量测定研究

尿酸是体内嘌呤和核酸物质的最终代谢产物，正常情况下血中尿酸浓度为20-60mg/L，当尿酸浓度过高时，常常引起痛风、肾结石、高血压和冠心病等，因此监测体内尿酸的浓度是非常必要。目前临床上测定尿酸的含量多采用尿酸酶法，但由于血浆中黄嘌呤、抗坏血酸和自由基的影响，使尿酸浓度测定结果误差较大，本文建立了高效液相色谱法和液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人血浆中尿酸和嘌呤物质的含量。

反相高效液相色谱法同时测定人血浆六种嘌呤物质的含量目的：建立同时测定血浆中6种嘌呤物质的高效液相色谱法，比较正常人与白血病和肝硬化患者血浆中6种嘌呤的含量差异，考察它们与白血病（Leukemia）和肝硬化（liver cirrhosis）疾病的关系。

方法：色谱柱：Phenomenex C18（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：50mmol/L醋酸铵（pH4.65）-甲醇（99:1，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样量：100μL。结果：尿酸、次黄嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、别嘌呤醇、腺嘌呤相邻峰之间的分离度分别为：5.39、1.64、3.56、5.45、5.39。尿酸在0.5-20μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9997；次黄嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤和别嘌呤醇在0.005-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r分别为0.9998、0.9993、0.9999和0.9993；鸟嘌呤在0.015-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9971。

结论：白血病和肝硬化患者血浆中的尿酸、次黄嘌呤和黄嘌呤含量明显高于正常人，腺嘌呤和鸟嘌呤无明显差异。第二部分高效液相/同位素稀释质谱法测定血浆中的尿酸及嘌呤物质目的：建立液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人血浆中尿酸、黄嘌呤和别嘌呤醇含量的方法。

方法：以[1,3-15N2]尿酸和[1,3-15N2]黄嘌呤为内标，乙腈为血浆蛋白沉淀剂，用电喷雾离子源的三重四极杆质谱仪，选择离子监测（SIM）模式检测目标离子（负离子模式，[1,3-15N2]尿酸:M/Z169；尿酸M/Z:167；[1,3-15N2]黄嘌呤:153；黄嘌呤M/Z：151；别嘌呤醇M/Z：135）,用峰高内标法定量。结果：尿酸在25-1028μmol/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9989；黄嘌呤和别嘌呤醇在10-400μmol/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r分别为0.9985、0.9951。用建立的两种方法对5个相同样品进行测定，测定结果基本一致。结论：高效液相色谱法可准确测定血浆中的尿酸及嘌呤物质的含量。

参考文献

[1]Uric Acid and Chronic Kidney Disease:New Understanding of an Old Problem[J].Duk-Hee Kang,Wei Chen.Seminars in Nephrology.2011(5)

[2]Uricase based methods for determination of uric acid in serum[J].Yunsheng Zhao,Xiaoyan Yang,Wei Lu,Hong Liao,Fei Liao.Microchimica Acta.2009(1-2)

[3]Simultaneous determination of creatinine and uric acid in human urine by high-performance liquid chromatography.[J].Zuo Yuegang,Wang Chengjun,Zhou Jiping,Sachdeva Amita,Ruelos Vanessa C.Analytical sciences:the international journal of the Japan Society for Analytical Chemistry.2008(12)

[4]Determination of uric acid in human urine and serum by capillary electrophoresis with chemiluminescence detection[J].Shulin Zhao,Jianshi Wang,Fanggui Ye,Yi-Ming Liu.Analytical Biochemistry.2008(2)

[5]彭建春.人血浆中尿酸及嘌呤物质的含量测定[D].重庆医科大学,2012.