杠柳甙元的提取方法和活性研究

背景及概述^[1]

杠柳甙元即杠柳苷元，杠柳苷元有强心和抗肿瘤等药理作用。据中华医学杂志[J].1956，7：651李章文等《杠柳皮(北五加皮)的强心作用》一文报道，杠柳苷元也有强心作用，而且起效迅速，蓄积性小。据中草药[J].2006，37(4)：519陈书红等《香加皮的抗肿瘤活性成分研究(I)》一文中报道：杠柳苷元对MCF-7肿瘤细胞增殖有很强的抑制作用。、

杠柳苷元为强心苷元，不仅具有强心作用，还具有抗炎、抗肿瘤等药理作用。顾为等发表的“杠柳苷元对肥大细胞脱颗粒及释放组胺影响的研究”和韩宇博等发表的“杠柳苷元的抗肿瘤作用研究”都对杠柳苷元做了实验验证。

杠柳苷元在中药香加皮中含量较低，制备难度较大，多是以杠柳毒苷为原料水解得来。

制备^[1-2]

报道一、

杠柳甙元的制备方法，其工艺步骤为：

(1)取香加皮提取物100克，用pH为3的盐酸水溶液与等体积的氯仿混合溶液进行酸水解，时间为1小时，温度为80℃。

(2)水解完毕分出氯仿层，浓缩干燥得到中间体A。

(3)将中间体A进行柱层析，柱填料为硅胶，采用梯度洗脱，洗脱剂为10∶0～10的乙酸乙酯—甲醇混合溶液；收集含有杠柳苷元的馏分，浓缩干燥后得到中间体B；

(4)将中间体B用乙醇进行重结晶，得到杠柳甙元结晶1.7克，收率为1.7％。

报道二、

香加皮药材粉碎，取1000g，加入8L90%甲醇溶液超声提取60min，滤过液体再加3L90%甲醇超声提取30min，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸馏水共沸1小时，加适量硅藻土趁热离心，收集离心液，柠檬酸调节pH4.5，加热至50℃，加入1g蜗牛酶保温酶解32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速800r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2ml/min，氯仿溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得杠柳甙元6.2g，含量96.6%。

抗癌机制^[3-4]

李世坚等人分析了中药香加皮杠柳甙元诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其作用机制。方法应用CellTiterGlo发光法检测杠柳甙元对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响,并计算其半数抑制浓度（IC50）;采用荧光定量PCR检测经杠柳甙元处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;采用Western blot法检测相应蛋白酶活性变化。结果 （1）在一定浓度范围内,随杠柳甙元浓度升高,对CNE2细胞增殖的抑制作用增加;杠柳苷元作用于CNE2细胞在48 h的IC50为1.712μmol/L。（2）杠柳苷元浓度为1μmol/L的caspase-3 mRNA表达量少量上升作用不明显、2μmol/L的caspase-3 mRNA表达量上升,有一定的作用（P<0.05）。而浓度为4μmol/L的caspase-3 mRNA表达量显著上调,差异显著（P<0.01）。与对照组相比,不同浓度下杠柳甙元的EGFR mRNA的表达量影响结果无统计学意义。（3）杠柳甙元处理CNE2细胞48 h后, 杠柳甙元组的caspase-3蛋白酶的表达水平较对照组显著上调（P<0.01）;EGFR蛋白酶表达量与对照组相比差异不大（P> 0.05）。结论杠柳甙元可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖,其机制可能为通过上调凋亡基因caspase-3及其蛋白酶的表达而诱导细胞凋亡

韩宇博等人研究了中药香加皮提取单体化合物杠柳甙元对体外培养S180、SGC-7901、A549、LOVO、MCF-7、Hep G2肿瘤细胞株的毒性作用,探讨杠柳甙元对荷瘤模型小鼠的抗肿瘤作用。方法四氮唑盐（MTT）法测定杠柳甙元对体外培养肿瘤细胞的毒性作用,移植性荷瘤动物模型评价杠柳甙元对整体动物的抗肿瘤作用。结果杠柳甙元对体外培养肿瘤细胞的毒性作用显著,对常见肿瘤细胞株的个数抑制浓度介于（0.461.50）μg/mL;荷瘤模型动物给予杠柳苷元10.0 mg/kg剂量时,S180实体瘤抑瘤率达到51.0%±17.0%,使荷腹水瘤小鼠存活时间延长94.2±13.1%,与临床常用抗肿瘤药物FU相当（P>0.05）;抗肿瘤作用有明显的剂量依赖关系;部分受试动物给药后出现食欲减退、脱毛、抗拒等不良反应,未见死亡。结论杠柳甙元有显著的抗肿瘤作用,同时也有一定的不良反应,其潜在开发价值有待进一步研究评价。

参考文献

[1][中国发明]CN200610013621.9一种杠柳苷元的制备方法

[2][中国发明]CN201110210631.2一种酶法水解制备杠柳苷元的方法

[3]李世坚,焦爱军.杠柳苷元诱导鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的研究[J].临床合理用药杂志,2021,14(17):30-32+35.DOI:10.15887/j.cnki.13-1389/r.2021.17.011.

[4]韩宇博,赵爱国.杠柳苷元的抗肿瘤作用研究[J].中国小儿血液与肿瘤杂志,2008(01):1-5.