TRIS-氯化铵红细胞裂解液的应用

背景^[1-3]

TRIS-氯化铵红细胞裂解液也称为Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为氯化铵。Tris-NH4Cl Lysis Buffer经过优化配方，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。对于裂解、去除有细胞核红细胞，例如鸟或禽类的红细胞，效果不佳，裂解类似细胞时，不建议采用。本裂解液经过滤除菌，经过Tris-NH4Cl Lysis Buffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

TRIS-氯化铵红细胞裂解液

自备材料：

胰蛋白酶、胎牛血清(FCS)、离心机、PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液

操作步骤：

1、制备细胞悬液:新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解:加入3～5倍细胞沉淀体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心:4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤：根据具体实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，400～500g离心2～3min，弃上清，离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。

7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

应用^[4][5]

用于尿酸在成年雄性大鼠的组织分布及组织液溶解度研究

了解正常成年雄性SD大鼠全身组织器官尿酸分布情况,及机理。探究尿酸在组织液中溶解度及溶解机制,为痛风和高尿酸血症的研究提供系统的实验依据。

[方法]1、大鼠尿酸组织分布研究:将正常成年SD雄性大鼠各组织器官取材匀浆,检测尿酸（钨蓝法）、蛋白含量（BCA法）;用第二代高通量测序技术检测Xdh和Uox在各组织器官中的基因表达量（mRNA水平）;用Western Blot技术检测Xdh和Uox在各组织器官中的蛋白表达量（蛋白水平）;用免疫组化和免疫荧光技术检测Xdh和Uox在各组织器官中的定位。

2、尿酸组织液溶解度研究:用纤维过滤器分离血清、血浆、红细胞裂解液中大、小分子后,对比热变性前后尿酸溶解度变化。用血清白蛋白、十二烷基硫酸钠、聚山梨酯80、苯扎溴铵模拟大分子的表面活性作用,检测其对尿酸的增溶作用机理。用碳酸氢钠、碳酸钠、磷酸盐模拟组织液中的主要碱性小分子物质,检测其对尿酸的增溶作用;检测超滤和热变性前后各组织液pH值变化,探寻pH对尿酸的增溶作用。

[结果]1、正常成年SD雄性大鼠组织器官尿酸含量肾上腺最高（1592.9209μg/g）,依次为十二指肠（1122.0436μg/g）、肝（483.4497μg/g）和回肠（283.2420μg/g）,血清中含量最低（11.5396μg/mL）,因此尿酸主要存在于消化系统,在肠道组织内尿酸含量逐步下降,其含量与Xdh表达有一定相关性,与Uox表达无相关性。

3、血清（1.4125mg/mL）和红细胞裂解液（0.9425 mg/mL）对尿酸具有较好的溶解作用。血清中对尿酸起增溶作用的主要为小分子物质。血清蛋白对尿酸有较弱的增溶作用,在血液中的贡献有限。碱性小分子物质对尿酸溶解起主要作用。

[结论]消化系统是尿酸存在的主要部位,组织液对尿酸具有较大的溶解能力,溶解度主要受小分子物质影响。

参考文献

[1]The dynamic lifecycle of mRNA in the nucleus[J].Rakefet Ben-Yishay,Yaron Shav-Tal.Current Opinion in Cell Biology.2019

[2]What Is the Biological Function of Uric Acid?An Antioxidant for Neural Protection or a Biomarker for Cell Death[J].Dequan Liu,Yu Yun,Dechun Yang,Xinyu Hu,Xianxiang Dong,Nan Zhang,Lumei Zhang,Hua Yin,Weigang Duan,Olav Lapaire.Disease Markers.2019

[3]Effects of Discontinuation of Urate-Lowering Therapy:A Systematic Review.[J].Beslon Virginie,Moreau Perrine,Maruani Annabel,Maisonneuve Hubert,Giraudeau Bruno,Fournier Jean-Pascal.Journal of general internal medicine.2018(3)

[4]Current and future therapies for gout[J].Pascart,Richette.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2017(12)

[5]胡欣瑜.尿酸在成年雄性大鼠的组织分布及组织液溶解度研究[D].昆明医科大学,2019.