鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体的应用

背景^[1-3]

鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体是一类可以特异性结合鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原的多克隆抗体，主要用于体外检测 鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原的免疫学实验。

卵黄蛋白(vitellin，Vn)是一种高密度糖脂蛋白，是所有卵生的脊椎动物和无脊椎动物雌性卵黄的主要成分，在卵黄发生期迅速积累，储存在卵中，是胚胎和幼体早期发育主要的营养来源。卵黄蛋白原(vitellogenin，vg)是卵黄蛋白的前体。

卵黄蛋白(Vitellin，Vn)是一种高密度糖脂蛋白，分子量在200—700Ku，是所有卵生动物卵黄的主要成分，约占卵黄蛋白总量的60—90%，卵黄蛋白是卵生动物胚胎及幼体发育的主要营养源，广泛分布于鸟类、鱼类、甲壳类等卵生动物中，其合成前体为卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vg)。

鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原免疫组化

卵黄蛋白对胚胎和幼体至关重要，除提供蛋白及必需氨基酸外，还提供糖类、维生素、磷等多种营养物质，同时还有转运脂肪的功能。研究表明，鱼苗在孵化后96小时内依靠卵黄蛋白来维持发育，而虾类在孵化后48小时左右完全依赖卵黄蛋白的营养来维持生存和发育。卵黄蛋白的营养转化效率高，为幼体发育提供了关键的营养基础，卵黄蛋白还具备结合类胡萝卜素、核黄素以及钙、锌、镁等金属离子的能力，尤其是结合钙的能力与胚胎的发育有密切关系。

卵黄蛋白除了具有营养和运输的功能外，一部分还具备免疫功能，这部分卵黄蛋白的构型具有特殊亚基构造，被称为卵黄球蛋白（Livetin）。一些卵黄蛋白还具备酶的功能，果蝇卵黄蛋白被证明有类似脂肪酶的功能，而有些虾类的卵黄蛋白具备蛋白酶的部分功能。卵黄球蛋白近年来越来越受到医学界的重视，在多种疾病治疗领域发挥了不可替代的作用。

应用^[4][5]

用于环境激素对鱼类生殖影响生物检测方法的建立研究

环境激素的生态效应已经引起人类的极大关注。由于环境激素种类多样,并且在环境中存在水平极低,为化学检测带来困难。因此,为了评价环境激素的污染状况及潜在危害,生物检测方法越来越受到人们的重视。

在对环境激素的研究中,目前已经建立检测特异标志物——卵黄蛋白原的ELISA方法和普通RT-PCR方法。前者需要制备特异抗体,程序复杂,且相对于从分子水平进行的基因表达定量方法灵敏度仍有较大差距;而普通RT-PCR方法在基因表达定量方面也存在准确性较差的缺点,不能有效地反映剂量效应关系。

本研究中通过对鱼类原代肝细胞暴露E2,采用Q-RT-PCR检测青鳉鱼和梭鱼VTG等基因的表达变化,期望建立较高灵敏度的环境雌激素效应评价方法。

主要取得了如下研究结果:（1）本实验通过对青鳉鱼肝脏细胞原代培养,建立了稳定的毒理学实验模型,与传统的活体暴露实验相比,节约了实验动物材料、实验周期及实验耗材。为环境激素毒理学研究奠定了基础。

（2）本研究中成功建立了实时定量RT-PCR与原代培养青鳉鱼肝细胞相结合的in vitro环境雌激素效应评价方法,并且显示出较高的灵敏度。

（3）VTG-I、VTG-II、CHG-H、CHG-L和ERα在体外培养青鳉鱼肝细胞中均与雌激素暴露浓度呈现较好的剂量效应关系,其中VTG-I、VTG-II、CHG-H、CHG-L作为检测雌激素的生物标记物基因可优先选择。

（4）本文通过扩增梭鱼VTG、β-actin基因,测定基因序列,建立检测E2暴露后梭鱼肝细胞VTG表达的实时定量RT-PCR方法。为环境激素的动态检测和分析鱼类对内分泌干扰物质的敏感性分析提供了方法学基础。

参考文献

[1]Effects of p,p′-DDE exposure on gonadal development and gene expression in Japanese medaka（Oryzias latipes）[J].Zhaobin ZHANG,Jianying HU.Journal of Environmental Sciences.2008(3)

[2]Vitellogenin synthesis in primary cultures of fish liver cells as endpoint for in vitro screening of the（anti）estrogenic activity of chemical substances[J].JoséM.Navas,Helmut Segner.Aquatic Toxicology.2006(1)

[3]Wild Intersex Roach（Rutilus rutilus）Have Reduced Fertility1[J].S.Jobling,S.Coey,J.G.Whitmore,D.E.Kime,K.J.W.Van Look,B.G.McAllister,N.Beresford,A.C.Henshaw,G.Brighty,C.R.Tyler,J.P.Sumpter.Biology of Reproduction.2002(2)

[4]The impact of oestrogenic and androgenic contamination on marine organisms in the United Kingdom—summary of the EDMAR programme[J].Peter Matthiessen,Yvonne Allen,Shaw Bamber,John Craft,Mark Hurst,Tom Hutchinson,Steve Feist,Ioanna Katsiadaki,Mark Kirby,Craig Robinson,Sandy Scott,John Thain,Kevin Thomas.Marine Environmental Research.2002(3)

[5]王琪.环境激素对鱼类生殖影响生物检测方法的建立[D].甘肃农业大学,2008.