网状纤维染色试剂盒(改良GOMORI银氨法)的应用

背景^[1-3]

网状纤维染色试剂盒(改良GOMORI银氨法)主要经过氧化、漂白、媒染、浸银、还原步骤，与改良Gordon-Sweets法不同之处在于后者采用酸性氧化剂和核固红复染液。冰冻切片、低温切片和火棉胶切片均可用于网状纤维染色，各种固定液均可采用，重金属汞盐或锇盐固定液偶尔会产生一些非特异性银背景。网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)常用于鉴别肿瘤的性质和来源、癌与肉瘤、淋巴肉瘤与网状细胞肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、骨尤文瘤与骨网状细胞肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤、恶性神经鞘瘤及早期浸润癌等。

网状纤维(Reticularfiber)是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞所产生，直径多在0.2～1.0μm，有韧性而没有弹性。网状纤维的染色方法很多，但染色原理基本一致，大都采用氨银浸法。改良Gomori网状纤维染色原理是利用氨银液易被组织吸附与组织的蛋白质结合，经甲醛还原成黑色或棕黑色的金属银，沉积于组织内及其表面。传统方法中还原后先采用氯化金调色，再用硫代硫酸钠溶液洗去组织上未还原的银盐，本改良法省略该步骤，使网状纤维对比得更清晰。

网状纤维染色

操作步骤：

1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。

2、切片厚4μm，常规脱蜡至水。

3、把切片平置在染色架上，滴加Gomori氧化剂，氧化5min。水洗；

入草酸溶液漂白1～2min。流水冲洗2min，蒸馏水稍洗。

4、硫酸铁铵溶液媒染5min。稍水洗，蒸馏水稍洗。

5、滴加网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)染色3min。蒸馏水稍洗。

6、Gomori还原剂还原1min。流水冲洗10min。

7、常规脱水透明，中性树胶封固。

应用^[4][5]

用于银杏叶提取物对大鼠肝纤维化的防治作用及其机制研究

研究EGB对大鼠CCl4肝纤维化形成的抑制作用及其机制。将40只大鼠随机分为正常对照组（N组）、EGB正常对照组（E组）、造模组（C组）和EGB预防组（CE组）。四组大鼠分别以生理盐水、EGB200mg·kg-1、生理盐水或EGB 200mg·kg-1灌胃，1次·天-1；同时分别以矿物油、矿物油、CCl4+矿物油（1：1）或CCl4+矿物油（1：1）0.15ml/只,腹腔注射，2次/每周。

于第8周末处死大鼠，应用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、Alb、TP和Tbil，观察肝功能变化；肝组织H&E染色、Masson染色和网状纤维染色，观察肝组织病理学变化；检测肝组织中MDA含量的变化；免疫组化方法检测肝组织αSMA蛋白表达的变化；RT-PCR法检测肝组织中MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表达的变化。

研究EGB对大鼠肝纤维化逆转的促进作用及其机制。大鼠CCl4腹腔注射8周后，将C组大鼠处死，经病理学检查证实为肝纤维化形成，将剩余18只大鼠随机分为2组：EGB治疗组（Y组）和自然恢复组（Z组），分别以EGB 200mg·kg-1和等体积生理盐水灌胃，1次/天，共2周，于实验末处死大鼠，同样进行肝脏病理学研究、肝功能检测、肝组织MDA含量检测和αSMA蛋白表达的免疫组化研究及肝组织MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表达的研究。

结果:C组肝纤维化形成，与N组相比较，C组大鼠肝纤维化程度明显增加，肝组织中胶原纤维和网状纤维含量明显增加，MDA含量明显增加，aSMA蛋白阳性染色面积明显增加（MMP-2、TIMP-l和TIMP-2基因表达明显增加（r分别为29.37，27.56，25.08，P<0.001），血清ALT、AST活性和Tbil水平明显升高（t分别为6.82、7.14和6.06），血清Alb、TP含量则明显降低（t分别为1221和1 3.79)。相对于C组，CE组大鼠肝功能改善，肝纤维化程度降低，肝组织中胶原纤维和网状纤维沉积明显减少，MDA含量降低，aSMA蛋白阳性面积明显减少，MMP-2、TIMP-l和TIMP-2基因表达减少。

参考文献

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