人参皂苷Rh2的生物活性及其在体内浓度分析

概述

人参皂苷Rh2是从人参中提炼出来的抗癌活性植物成分，目前已被已被越来越多的肿瘤患者所认可，改善病人生活质量、延长生命具有很好的效果，故享有了“护命素”的美誉。护命素具体表现为辅助治疗各类癌症，化学名为原人参二醇-3-氧-B-D-吡喃葡萄糖苷，即人参皂苷Rh2。

生物活性^【1】

1．抗肿瘤作用

人参皂苷Rh2能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖，并存在时间依赖性和浓度依赖性。10ug／mL人参皂苷Rh2作用6天的抑制率达50％；而20ug／mL人参皂苷Rh2作用4天抑制率也近50％，肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转。进一步研究表明，人参皂苷Rh2能使SMMC-7721细胞血清甲胎蛋白合成明显下降，分泌量从6．60％±0．30％下降到2．35％±0．06％，，γ-CT及耐热型白蛋白(AIb)活性显著降低，碱性磷酸酶活性及Alb分泌量显著升高。用人参皂苷Rh2处理人肝癌SK—HEP-1细胞会使其发生明显凋亡，在凋亡过程中c-Jun末端蛋白酶的活性随之显著上升，同时有Bcl一2敏感的caspase一3蛋白激酶活化。同时，人参皂苷Rh2对人肝癌细胞Bel一7404的增殖和凋亡也有一定影响。

人参皂苷Rh2可通过诱导p21蛋白质表达、降低cyclin D蛋白质水平、降低pRb磷酸化和抑制E2F释放等机制来抑制人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的生长，且抑制作用呈量效关系，可使细胞分裂停止在G1期，但其作用是可逆的。人参皂苷Rh2在体外浓度为10～60umol／L能抑制多种人类卵巢癌细胞株的增殖，且呈剂量依赖，在IC50浓度左右可导致细胞凋亡。

研究人参皂苷Rhz对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用，结果发现在10mg／L浓度下对B16细胞有较强的分化诱导作用，主要表现为黑色素生成能力明显增加；形态向正常上皮样细胞分化；细胞呈网状结构；黑色素颗粒增加；生长变缓慢。用浓度为10mg／L的人参皂苷Rh2处理黑色素合成的限速酶酪氨酸，4h后酪氨酸活性明显升高，与黑色素生成能力成正比，说明人参皂苷Rh2可诱导小鼠黑色素瘤B16细胞向正常色素细胞分化。人参皂苷Rh2还可抑制人恶性黑色素瘤A375～S2细胞的生长，其凋亡的发生部分依赖于caspase一3和caspase-8的通路。

另外，人参皂苷Rh2对前列腺癌细胞株、肺腺癌耐药细胞、食管癌细胞和人白血病细胞等癌细胞均具有一定的诱导凋亡能力。

2．抗过敏作用

人参皂苷Rhz能抑制免疫球蛋白E诱导RBL-2H3细胞释放β一氨基已糖苷酶(IC50为0．1mmol／L)和小鼠被动皮肤过敏反应[25mg／kg腹膜内注射时抑制率为(88％+8．2％)]，作用强于色甘酸钠。在不同的扫描测热计上人参皂苷Rh2显示膜稳定作用，对脂多糖刺激RAW 264.7细胞产生的一氧化氮和前列腺素E2具有抑制作用。

3．免疫调节作用

人参皂苷Rh2及其化学衍生物硫酸化人参皂苷Rh2低浓度时都能促进淋巴细胞增殖，高浓度时都能抑制淋巴细胞增殖，硫酸化人参皂苷Rh2显著高于同浓度的人参皂苷Rh2；人参皂苷Rh2能显著促进鸡外周血自然杀伤细胞的杀伤活性。研究表明人参皂苷Rh2体外能抑制免疫活性，化学修饰后的硫酸化人参皂苷Rh2体外能促进免疫活性。

药代动力学^【2】

1．吸收

在人肠Caco一2细胞单层模型，人参皂苷一Rh2及其苷元原人参二醇能量依赖性被吸收，且呈时间和浓度依赖性关系，低温降低其吸收率。当pH=7．0时，人参皂苷一Rh2的吸收达；当pH=8．0时，原人参二醇的吸收达。动力学分析表明：人参皂苷一Rh2的吸收呈非饱和性，Kd=0．17nmol/h/mg蛋白，转运的Kd=3．95 mmol/L, Vmax=4．78nmol/h/mg蛋白；原人参二醇的吸收亦呈非饱和性，Kd=0．78nmol/h/mg蛋白。P一糖蛋白与人参皂苷一Rh2的转运有密切关系。其结果提示肠内细菌对人参皂苷一Rh2的生物转化可能影响其生物利用度。按0．1mg/kg剂量静脉或lmg/kg剂量灌胃给予犬人参皂苷一Rh2，其在雄性犬的生物利用度为17．6％，在雌性犬的生物利用度为24．8％。    ’

2．代谢

给犬按0．1mg/kg剂量静脉注射或按lmg/kg剂量灌胃人参皂苷一在血浆中可检测到其代谢产物原人参二醇。

分析方法

1．高效液相色谱一质谱联用法分析人参皂苷一Rh2在人肠Caeo一2细胞中的浓度

仪器：日本岛津高效液相色谱仪，10 Advp泵；日本岛津LC—MS 2010型液相一质谱联用系统，检测模式为电喷雾离子化方式(ESI)。    。

色谱条件：ODS色谱柱(150 mm×2．1 mm I．D．，5um)，连有C18预处理柱；流动相为乙腈一500 mmol/L氯化铵水溶液，起始为68：32，4min；随后为95：5。梯度流速为0．2mL/min。干燥气流速为4．5 L/min；CDL电压固定，CDL温度为250℃。

2．高效液相色谱一质谱联用法分析人参皂苷一Rll2在犬血浆中的浓度

仪器和色谱条件同上法。

分析样品的处理：取犬血浆用固相萃取柱处理，然后进行高效液相色谱一质谱联用分析。

系统适用性试验：人参皂苷一Rh2在犬血浆中的检测范围为2．0―1250．0ng/ml。日内和日间RSD皆小于10％，回收率大于80％。

参考文献

[1] 刘斌著,中药成分体内代谢与分析,中国中医药出版社,2011.08,第251页

[2] 杨秀伟编著,中药成分的吸收、分布、代谢、排泄、毒性及药效  上册,中国医药科技出版社,2006年8月,第1044页