PROTEIN G AGAROSE的应用

背景及概述

PROTEIN G AGAROSE又叫protein G琼脂糖。蛋白G是从G类链球菌（Streptococci）中分离出来的胞壁蛋白，分子量25kDa。蛋白G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物单抗和多抗IgG。相对于蛋白A，蛋白G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力，尤其是对于IgG的亚基，如人 IgG3，小鼠IgG1和鼠 IgG2a。与蛋白A不同，蛋白G不与狗IgG结合、不结合人IgM，IgD，或IgA。此外，蛋白G还可以和某些抗体的Fab 和F (ab’)2 段结合。蛋白G 琼脂糖将蛋白G作为亲和配基被偶联到琼脂糖凝胶基质上，可以广泛、更强地结合更多类型的IgG, 多克隆IgG及人IgG，同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对更低。

应用 ^[1]

LRR受体激酶是一种表达在植物细胞膜表面的跨膜蛋白。LRR受体激酶作为重要的影响植物生长发育的一类调控分子，广泛作用于各类信号转导过程。

在研究LRR受体激酶的过程中，其下游效应因子的获得，通常是在过表达靶基因的背景下将转基因植株进行突变。而抑制表型的突变体所含有的突变基因所对应的蛋白便是受体激酶的下游靶标。而另一种寻找LRR受体激酶下游直接效应因子的方法便是酵母双杂交，但较低的得率以及假阳性也会使得该方法使用受限。另外，作为膜蛋白，LRR受体激酶通常很难纯化。这也使得常规的生化策略很难找到其直接下游底物。CN201810528770.1提供一种LRR受体激酶的底物寻找方法，其包括：S1：将LRR受体激酶与ATP-γ-S进行孵育，得到混合物；S2：将所述混合物与富含所述LRR受体激酶的组织的总蛋白进行孵育，得到第二混合物；S3：将所述第二混合物与PNBM进行孵育，得到第三混合物；

S4：去除所述第三混合物中的PNBM，得到第四混合物；S5：将所述第四混合物用预处理的protein G琼脂糖进行孵育，离心得到上清液；S6：将与protein G琼脂糖偶联的抗硫代磷酸酯的单克隆抗体与所述上清液进行孵育，得到沉淀物；S7：对所述沉淀物进行分析，确定所述LRR受体激酶的底物。

主要参考资料

[1] CN201810528770.1 LRR受体激酶的底物寻找方法