ZR-75-1 人乳腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

ZR-75-1人乳腺癌细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）；该细胞表达WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。 ZR-75-1细胞产生高水平的黏液素MUC-1 mRNA，低水平的MUC-2 mRNA，但不表达MUC-3基因；ZR-75-1细胞表达雌激素受体。

ZR-75-1人乳腺癌细胞

细胞传代：

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3.传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

应用^[4][5]

用于DERL1激活PI3K/Akt通路调控人乳腺癌细胞的增殖和凋亡的实验研究

研究DERL1对人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7增殖和凋亡的作用及其机制。

方法:1.DERL1在人乳腺癌组织和细胞中的表达水平:在TCGA数据库中收集DERL1在人乳腺癌以及乳腺正常组织中的表达情况并进行分析;用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）和免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）检测DERL1在人乳腺癌和癌旁正常组织中的表达差异;用qRT-PCR和免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）检测DERL1在人正常乳腺上皮细胞HBL-100和人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7中表达的差异。

2. DERL1对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用:将人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7分别各自分为3组,即DERL1过表达组、DERL1干扰组和对照组,各组细胞中分别转入DERL1过表达质粒、DERL1干扰质粒和空白质粒;转染48 h后,用ICC检测各组细胞中DERL1的表达水平,然后用结晶紫染色实验和集落实验检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞术检测各干预组细胞的凋亡情况;进一步用ICC检测各组细胞中增殖标记因子Ki67和Cyclin D,凋亡抑制因子Bcl-2以及凋亡促进因子Bax的表达水平。

3. DERL1影响人乳腺癌细胞增殖凋亡的作用机制:用ICC检测各组细胞中PI3K/Akt通路上的信号分子Akt和磷酸化Akt的表达水平。

结果:1.DERL1在人乳腺癌组织和细胞中表达水平分别高于乳腺正常组织和人正常乳腺上皮细胞,并且体内DERL1水平较高的患者生存率较低;DERL1与PI3K/Akt通路上重要信号分子PI3K和Akt具有较强的相关性。

2. DERL1过表达质粒可使人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7中DERL1蛋白的表达水平增加,DERL1干扰质粒可使该细胞中DERL1蛋白水平减少;在人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7中过表达DERL1可促进细胞的增殖,抑制其凋亡,并能上调细胞中Ki67、Cyclin D和Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达;在细胞中干扰DERL1的表达则可抑制细胞的增殖,促进其凋亡,且细胞中Ki67、Cyclin D和Bcl-2蛋白的表达量均下降,Bax蛋白的表达量上升。

3.在人乳腺癌细胞ZR-75-1和MCF-7中过表达DERL1,可上调细胞中Akt和磷酸化Akt的表达量,在细胞中干扰DERL1的表达则细胞中Akt和磷酸化Akt的表达量均下降。

参考文献

[1]Cancer statistics,2019[J].Rebecca L.Siegel MPH,Kimberly D.Miller MPH,Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2019(1)

[2]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD,Jacques Ferlay ME,Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD,Rebecca L.Siegel MPH,Lindsey A.Torre MSPH,Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2018(6)

[3]Cancer statistics in China,2015[J].Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Peter D.Baade,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Freddie Bray,Ahmedin Jemal,Xue Qin Yu,Jie He.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2016(2)

[4]Cancer statistics,2016[J].Rebecca L.Siegel,Kimberly D.Miller,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2016(1)

[5]胡露.DERL1激活PI3K/Akt通路调控人乳腺癌细胞的增殖和凋亡的实验研究[D].重庆医科大学,2019.