单克隆抗体制备技术服务的应用

背景^[1-3]

单克隆抗体制备技术服务包括抗原制备，细胞融合筛选，亚克隆，单抗制备等。单克隆抗体制备技术服务根据抗原性质、数量、纯度，选择合适的免疫方案；并通过选择培养基筛选融合细胞，并对融合细胞进行ELISA阳性筛选及亚克隆；筛选出的阳性单克隆，取腹水，用Protein A/G抗体纯化柱纯化抗体，纯化后的抗体ELISA效价>1:128,000，纯度>90%。交付的高质量的单克隆抗体可以用于免疫组化、ELISA、体外诊断检测等下游实验。

单克隆抗体制备技术服务

单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合；加入HAT选择培养基(含H、A和T)后，未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断，而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA，从而死亡；未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡；融合细胞因从脾细胞获得HGPRT，故可在HAT选择培养基中存活和增殖。

临床应用

疾病诊断：利用单抗进行疾病的诊断目前主要表现在人类疾病和畜禽传染病的诊断方面，尤其在一些感染性疾病和肿瘤的诊断方面。主要通过鉴定病原体或肿瘤抗原来诊断人是否感染相应疾病。

疾病治疗：目前利用单抗对疾病进行治疗已取得了很大的成果，主要是将单抗同药物耦联，再与病原体或肿瘤的特异抗原结合后发挥作用。

食品卫生：目前，单克隆抗体技术在食品生产加工以及科学研究中得到广泛的应用，食品基质中的细胞、大分子聚合物的小分子半抗原物质均能通过单克隆技术研究或检出。如，用单克隆抗体技术快速检测食品中的农兽药。单克隆抗体在乳品工业中主要用于牛奶成分分析，尤其对非正常风味牛奶的微生物与酶的鉴定;牛奶中的病原微生物和毒素的检测;加工工艺对牛奶蛋白结构的影响以及牛奶中掺物的识别。

应用^[4][5]

用于鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究

制备鼠抗人GL50分子的单克隆抗体并对其进行相关生物学特性的鉴定；利用自主研制的GL50mAb，研究ICOS／GL50信号途径在机体体液免疫应答和肿瘤免疫中的生物学作用。

实验方法：（1）以天然高表达人GL50分子的B淋巴瘤Daudi细胞为免疫原免疫Balb／C小鼠；

（2）采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合；

（3）以人GL50-L929、VK-L929转基因细胞为目的单抗的筛选细胞，通过间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞株进行筛选；

（4）单抗标记生物素，通过竞争抑制实验检测单抗识别抗原位点的情况；

（5）采用常规方法制备染色体，分析杂交瘤细胞核型；

（6）采用免疫亲和层析纯化腹水型单抗；

（7）快速试纸鉴定单抗类型；

（8）采用间接免疫荧光标记法测定单克隆抗体的效价，并检测单抗在不同细胞株和细胞上的表达；

（9）Western-blotting实验检测单抗与Daudi细胞和GL50-L929转基因细胞GL50膜蛋白的结合能力；

（10）免疫组织化学检测单抗对不同组织中GL50分子的识别能力；

（11）采用3H-TdR法，利用自行制备的GL50mAb并结合GL50-L929转基因细胞，研究ICOS／GL50信号途径在活化T细胞体外增殖中的作用；

（12）采用ELISA法检测GL50-L929和自行制备的GL50mAb对活化T细胞分泌细胞因子IL-2和IL-10的影响，并检测ICOS-L929和GL50mAb对PWM介导的B细胞分泌抗体的生物学效应；鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究中文提要曲细胞计数和M了T法研究单抗对Daudi细胞体外生长的抑制作用:叨PI标记法以及AnnexinV一PI双标记法检测单抗对Daudi细胞周期和凋亡的影响。

参考文献

[1]Diagnostic role of serum glypican‐3 in differentiating hepatocellular carcinoma from non‐malignant chronic liver disease and other liver cancers[J].PisitTangkijvanich,TheerawutChanmee,SanpojKomtong,VarochaMahachai,NaruemonWisedopas,PeraphanPothacharoen,PrachyaKongtawelert.Journal of Gastroenterology and Hepatology.2009(1)

[2]Glypican-3 is a useful diagnostic marker for a component of hepatocellularcarcinoma in human liver cancer[J].Hirofumi Shirakawa,Toshimitsu Kuronuma,Yoshiko Nishimura,Takahiro Hasebe,Masayuki Nakano,Naoto Gotohda,Shinichiro Takahashi,Toshio Nakagohri,Masaru Konishi,Nobuaki Kobayashi,Taira Kinoshita,Tetsuya Nakatsura.International Journal of Oncology.2009(3)

[3]Early HCC:diagnosis and molecular markers[J].Michiie Sakamoto.Journal of Gastroenterology.2009(19)

[4]Distinction of Hepatocellular Carcinoma From Benign Hepatic Mimickers Using Glypican-3 and CD34 Immunohistochemistry[J].Wanda M.P.Coston,Sofia Loera,Sean K.Lau,Shin Ishizawa,Zhong Jiang,Chin-Lee Wu,Yun Yen,Lawrence M.Weiss,Peiguo G.Chu.The American Journal of Surgical Pathology.2008(3)

[5]朱伟.鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究[D].苏州大学,2004.