JEG-3人绒毛膜癌细胞的应用

背景^[1-3]

JEG-3人绒毛膜癌细胞是一株超三倍体人类细胞株。JEG-3细胞的典型染色体数为71，发生率为34%，多倍体率为2.6%。t(4;11)(p15;q13)，i(13q)，t(10p15q)，del(18)(q21)和6个其他标记在大多数细胞中常见，另有两个标记在一些细胞中可见，在一个N14和两个N22中可见大卫星。N2、N5和N9有4个拷贝，而N7、N13、N18、N21和X为单拷贝，Q-带检测法可以检测到单个Y染色体。

JEG-3人绒毛膜癌细胞

细胞培养步骤

培养基及培养冻存条件准备：

准备MEM培养基(GIBCO,货号41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，丙tong酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

细胞处理：

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

应用^[4][5]

用于绒毛膜癌转移基因的筛选及沉默相关基因对其侵袭力影响的研究

高低侵袭力绒毛膜癌细胞株差异表达基因的筛选和鉴定目的采用基因芯片技术比较高、低侵袭力绒毛膜癌细胞株JEG-3和JAR的基因表达谱,以筛选出与绒毛膜癌侵袭转移相关的基因,为阐明绒毛膜癌侵袭转移的分子机制提供理论依据。

方法：（1）应用MTT和Matrigel体外侵袭试验检测不同人绒毛膜癌细胞系JEG-3与JAR之间增殖能力和侵袭能力的差异;

（2）提取绒毛膜癌细胞株JEG-3和JAR的总RNA,反转录制备杂交探针,运用基因芯片进行杂交,杂交信号用Agilent Scanner扫描,用Imagene软件和Genespring软件分析和处理数据;

（3）应用RT-PCR技术检测小窝蛋白-1（CAV-1）和血管内皮细胞生长因子B（VEGF-B）在JEG-3和JAR绒毛膜癌细胞株中的表达情况,进而验证基因芯片结果的可信度。

结果（1）JEG-3和JAR细胞之间增殖能力的差异无显著性（P＞0.05）,但JEG-3细胞的侵袭能力显著高于JAR细胞（P＜0.05）;

（2）对绒毛膜癌JEG-3和JAR细胞株的基因表达谱分析,发现两者表达差异显著的基因有742个,其中在JEG-3细胞中321个基因表达上调,422个基因表达下调,上调基因中与细胞侵袭转移能力有关的基因有51个,其中差异最显著的前五位分别是纤维连接蛋白（FN）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）、小窝蛋白-1（CAV-1）和血管内皮细胞生长因子B（VEGF-B）;

（3）CAV-1和VEGF-B mRNA在JEG-3细胞中的表达水平显著高于在JAR细胞中的表达水平,结果与基因芯片结果一致。

结论（1）多个侵袭转移相关基因的表达在绒毛膜癌JEG-3和JAR细胞间存在着差异;

（2）基因芯片技术能有效地分析各细胞系的基因表达谱、为研究绒毛膜癌转移机制提供新的途径。

参考文献

[1]VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats[J].Li,Yang,Zhang,Fan,Nagai,Nobuo,Tang,Zhongshu,Zhang,Shuihua,Scotney,Pierre,Lennartsson,Johan,Zhu,Chaoyong,Qu,Yi,Fang,Changge,Hua,Jianyuan,Matsuo,Osamu,Fong,Guo-Hua,Ding,Hao,Cao,Yihai,Becker,Kevin G,Nash,Andrew,Heldin,Carl-Henrik,Li,Xuri.Journal of Clinical Investigation.2008(3)

[2]Vascular endothelial growth factor（VEGF）signaling in tumor progression[J].Robert Roskoski.Critical Reviews in Oncology and Hematology.2007(3)

[3]Heparanase expression correlates with metastatic capability in human choriocarcinoma[J].Cai Jingting,Zhang Yangde,Zhang Yi,Liu Huining,Yu Rong,Zhang Yu.Gynecologic Oncology.2007(1)

[4]The prognostic value of vascular endothelial growth factors（VEGFs）-A and-B and their receptor,VEGFR-1,in invasive breast carcinoma[J].Eleni Mylona,Paraskevi Alexandrou,Ioanna Giannopoulou,George Liapis,Markaki Sofia,Antonios Keramopoulos,Lydia Nakopoulou.Gynecologic Oncology.2007(3)

[5]刘惠宁.绒毛膜癌转移基因的筛选及沉默相关基因对其侵袭力影响的研究[D].中南大学,2008.