CHARM ROSAΒ-内酰胺酶试剂盒的应用

背景^[1-3]

CHARM ROSAΒ-内酰胺酶试剂盒利用免疫原理,运用ROSA侧流技术(快速一步检测),快速检测牛奶中的β-内酰胺和四环素残留,包括氨苄西林、阿莫西林、头孢乙腈、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢喹诺、头孢噻夫及其代谢物、头孢呋肟、头孢匹林、氯唑西林、双氯西林和青霉素G以及四环素族中的金霉素、土霉素和四环素。

β-内酰胺是指一类含有四元内酰胺环的有机结构。β-内酰胺结构常出现在抗生素中，包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类、碳青霉烯和青霉烯类酶抑制剂等以及新发展的头霉素类、硫霉素类、单环β-内酰胺类等其他非典型β-内酰胺类抗生素。基本上所有在其分子结构中包括β-内酰胺核的抗生素均属于β内酰胺类抗生素。它是抗生素中使用广泛的一类。

CHARM ROSAΒ-内酰胺酶试剂盒

特点：

无需样品处理,一步操作。

自带阳性质控。8分钟报告检测结果。

可检测牛奶、羊奶、牦牛奶、成品乳制品等。

可同时筛选16种β-内酰胺类抗生素和3种四环素类抗生素。

应用^[4][5]

用于β-内酰胺酶快速检测试剂盒的研究

β-内酰胺酶俗称生鲜牛乳抗生素分解剂，又名解抗剂或金玉兰酶制剂，它是由革兰氏阳性细菌产生和分泌的，可选择性分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素。β-内酰胺酶是违法添加的非食用物质，它的使用掩盖了牛奶中抗生素的残留。

β-内酰胺酶分解青霉素钾的分解产物是青霉噻唑酸，青霉噻唑酸具有还原性和酸性，运用碘量法、酸度法、高效液相色谱法、分光光度法等方法测定样品中青霉噻唑酸的含量，间接检测牛奶中的β-内酰胺酶。

利用SDS-PAGE电泳法对β-内酰胺酶标准品和市场上的生鲜牛乳抗生素分解剂进行对比研究，确定生鲜牛乳抗生素分解液的成分为β-内酰胺酶。使用碘量法分别检测β-内酰胺酶标准品和生鲜牛乳抗生素分解剂的酶活度。

测定结果表明β-内酰胺酶标准品的酶活度为24.552万U/mL，生鲜牛乳抗生素分解剂的酶活度为23.808万U/mL。利用液质联用色谱仪对青霉素钾酶解产物进行分析,质谱图中青霉素钾的特征峰m/z373不明显，未出现m/z333和m/z289峰，青霉噻唑酸特征峰m/z307.0出峰明显，表明青霉素钾在β-内酰胺酶作用下基本完全酶解，酶解后的主要产物是青霉素噻唑酸。

用pH为12～14的氢氧化钠溶液把青霉素钾完全水解成青霉噻唑酸，利用高效液相色谱法测定青霉素钾及青霉噻唑酸的出峰时间，并研究青霉噻唑酸和β-内酰胺酶浓度的相关性。随着β-内酰胺酶添加量的增加，青霉素噻唑酸的峰值逐渐增大，R2为0.9331，线性关系良好，青霉噻唑酸的含量与β-内酰胺酶的含量呈正相关。

参考文献

[1]Insights into the reaction ofβ-lactam antibiotics with copper（II）ions in aqueous and micellar media:Kinetic and spectrometric studies[J].Alfonso Fernández-González,Rosana Badía,Marta Elena Díaz-García.Analytical Biochemistry.2005(1)

[2]The combined effects of pH and temperature on penicillin G decomposition and its stability modeling[J].A Kheirolomoom,A Kazemi-Vaysari,M Ardjmand,A Baradar-Khoshfetrat.Process Biochemistry.1999(1)

[3]In Vitro Measurement ofβ-Lactamase-Catalyzed Ampicillin Hydrolysis by Recombinant Escherichia coli Extracts Using Quantitative High-Performance Liquid Chromatography[J].Jennifer L.Urbain,Christopher M.Wittich,Stephen R.Campion.Analytical Biochemistry.1998(2)

[4]Modified fluorimetric assay for estimating ampicilloate concentrations and its use for detecting beta-lactamase and penicillin acylase activity in bacteria.[J].Baker W L.The Analyst.1997(5)

[5]张鑫潇.β-内酰胺酶快速检测试剂盒的研究[D].河南工业大学,2011.