17-羟孕酮(17-OHP) ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

17-羟孕酮(17-OHP)ELISA KIT是利用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）的方法检测样本中17羟孕酮(17-OHP)的水平。

原理：已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

17-羟孕酮(17-OHP)ELISA KIT

操作步骤：

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的临床及遗传学研究

了解17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的病因及发病机制、病理生理、分子遗传学特点，探讨其临床表现、诊断及治疗，提高对该病的认识，以减少误诊。

方法：以1例17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症患者为研究对象，全面收集其临床资料和实验室资料，进行CYPl7A1基因检测，并文献复习。

结果1.患者临床表现为第二性征不发育、原发性闭经、高血压、反复四肢乏力，实验室检查提示血皮质醇下降、促肾上腺皮质激素升高；雌二醇、硫酸脱氢表雄酮下降，促性腺激素升高；17-羟孕酮下降、孕酮升高；血钾、血浆肾素活性、醛固酮下降。彩超提示幼稚子宫。肾上腺CT提示双侧肾上腺明显增粗。

结合临床及辅助检查结果，考虑完全性联合缺陷型17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症。2.CYPl7A1基因测序分析提示患者为复合杂合突变，第8外显子D487F489del突变及第6外显子TAC329AA突变。第8外显子9个碱基GACTCTTTC（1459-1467）缺失，导致第487-489位氨基酸Asp–Ser–Phe缺失。

第6外显子编码329位密码子的核苷酸碱基由TAC变为AA，导致Tyr329Lys错义突变及此后的移码突变，并在418位提早产生终止密码。这两种突变均为已报道的致病突变，可致17α-羟化酶、17,20-裂解酶活性完全缺失。

参考文献

[1]17α-hydroxlyase/17,20-lyase Deficiency in Three Siblings with Primary Amenorrhea and Absence of Secondary Sexual Development[J].Y.K.Oh,U.Ryoo,D.Kim,S.Y.Cho,D.K.Jin,B.K.Yoon,D.Y.Lee,D.Choi.Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology.2012(5)

[2]Clinical and genetic analysis for two Chinese siblings with 17α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency[J].Qi Zhou,Chaoming Wu,Liang Wang,Jingchen Zheng,Chao Zheng,Jian Jin,Yanying Qian,Li Ni.Gynecological Endocrinology.2012(6)

[3]Three novel CYP17A1 gene mutations（A82D,R125X,and C442R）found in combined 17α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency[J].Yue-Ping Wang,Jing Li,Jian-Xin Li,Yun-Jing Zhao,Dan-Ye Zhang.Metabolism.2011(10)

[4]Prevalence of common mutations in the CYP17A1 gene in Chinese Han population[J].Xunna Bao,Hu Ding,Yujun Xu,Guanglin Cui,Yebing He,Xuefeng Yu,Dao Wen Wang.Clinica Chimica Acta.2011(13)

[5]郭秋璇.17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的临床及遗传学研究[D].福建医科大学,2014.