车前草提取物的制备及药理作用

背景及概述^[1][2]

车前草属于车前科植物车前（Plantago asiatical L.）的全草，为常用中药，全国各地均有产出。车前草具有清热解毒、清肝明目、利尿、祛痰、抑菌等作用，主治淋证、水肿、尿血、痛肿、热痢等。

制备^[1]

分别称取车前草粗粉100g，各加60%vol、 70%vol、80%vol、 90%vol乙醇500mL，85℃回流提取2次，每次1h，提取液浓缩至干，得4种不同浓度乙醇的提取物。再将部分80%vol乙醇粗提物悬浮于水中，依次用石油醚、 氯仿、 正丁醇萃取，浓缩至干，得石油醚相、氯仿相、正丁醇相和水相4种萃取物，并于无菌瓶中4℃以下保存备用。

药理作用^[1-2]

1、抑菌杀菌作用    

不同浓度乙醇提取物对17种测试菌的抑制作用（见表1）

从表1可以看出，60%vol、 70%vol、 80%vol、 90%vol乙醇4种总提物对所有测试菌均具有不同程度的抑制作用。80%vol乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌、假丝酵母、西瓜枯萎病菌、青霉、苹果腐烂病及番茄灰霉等病菌抑菌圈直径为11mm~16mm，有强抑制作用，对黄瓜枯萎病、草莓镰刀菌、辣椒疫霉菌和烟草赤星的抑菌圈直径为9mm~10mm，总体抑菌效果。90%vol乙醇提取物 对假丝酵母、青霉及番茄灰霉抑菌圈直径为11mm~15mm，有较强抑制作用，总体抑菌效果较好。60%vol乙醇和70%vol乙醇也具有较强的抗菌活性，对测试菌均有不同程度的抑制作用。由此可见，车前草抗菌活性的是80%vol乙醇提取物，又对80%vol乙醇提取物用不同极性溶剂萃取，将得到的4种不同极性萃取物，进一步做抗菌活性测试。

 不同溶剂萃取物对17种测试菌的抑制作用（见表2）

由表2可以看出，4种不同溶剂萃取物对17种测试菌均有不同程度的抑制作用，其中正丁醇萃取物的总体抗菌活性最强，尤其是对金黄色葡萄球菌、 假丝酵母和番茄灰霉抑制作用。 氯仿萃取物总体抗菌活性次之。 石油醚萃取物及水相浸膏抗菌活性相对较弱，其中石油醚萃取物对烟草赤星的抑制作用最强，水相浸膏对苹果腐烂病菌有很强的抑制作用。

研究结果表明，车前草不同浓度乙醇的提取物及不同溶剂的萃取物具有较强的抗菌作用，尤其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、青霉和假丝酵母等常见食物致病菌的抑制作用显著，对常见植物病原真菌苹果腐烂病菌、黄瓜枯萎病菌、烟草赤星、草莓镰刀菌、番茄灰霉等的抑制作用也较好。由此可见车前草粗提物可以进一步作为高效无毒、无公害的新型植物源食品抗菌剂进行研究。

2、抗氧化作用

夏道宗等对小鼠进行抗氧化机制实验，通过注射不同剂量的车前草总黄酮（total flavonoids from Plantago asiaticaLinn.，TFPA），认为其抗氧化机制为 TFPA 可抗氧化酶活性从而有效清除 ADPPH 自由基和 ABTS+ 自由基，显著抑制脂质体的过氧化进程（具有量效关系），达到抗氧化的作用。进一步研究表明，车前草中的多酚类也具有抗氧化作用，有研究发现车前草乙醇提取物内均含有总多酚，且均具有明显清除 DPPH 自由基和 ABTS 自由基的能力，各相的抗氧化活性与总多酚含量成正比。进一步研究通过建立运动负荷递增大鼠模型，发现服用车前草多糖的实验组大鼠和对照组相比力竭运动时间明显延长，且实验组大鼠肌肉内谷胱甘肽过氧化物酶超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶的活性得到明显的提高（P<0.05），该实验表明车前草多糖可通过提高体内抗氧化酶的活性，来减轻细胞内部的自由基损伤。

3、免疫作用

李守汉建立运动负荷大鼠递增模型，发现服用车前草多糖的实验组大鼠的白细胞、T 淋巴细胞亚群（CD4+，CD8+）和淋巴细胞（LYM）数明显上升，提示车前草多糖（plantagoasiatica polysaccaride，PLP）可提高机体免疫系统的免疫活性，增强免疫力。有实验认为车前草多糖也可以发挥免疫调节功能，但具体作用机理目前尚未有实验证实。

李乐天采用分子生物学方法，基于细胞自噬及其调控信号通路的交互作用来研究 PLP 对细胞自噬的调节作用及其机制，以磷脂多糖（LPS）诱导 Raw246.7 巨细胞发生自噬，认为 PLP 促进自噬细胞的自噬体数量增加，认为促进巨噬细胞自噬可能与自噬相关蛋白 LC3 和 beclin-1 表达水平的上调以及激活III- PI3K 通路有关。郑业龙研究发现车前草多糖饲喂的雏鸡随着养殖天数的增加，其胸腺指数、脾脏指数较于空白对照组均明显增高，且观察脾脏切片时发现，实验组雏鸡的脾脏红髓巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞等免疫相关细胞均较对照组多，认为车前草多糖通过促进雏鸡免疫器官的发育、抗体的产生及淋巴细胞的增殖分化。采用对照实验，分别以注射车前草多糖作为佐剂的疫苗和普通疫苗后的雏鸡脏器指数、HI 抗体效价、外周血 T 细胞增殖程度作为观察指标，发现前者上述指标的升高明显高于后者，即车前草多糖可作为疫苗佐剂提高疫苗的效果。

主要参考资料

[1]孔阳,马养民,李彦军,李宁.车前草提取物抗菌活性的研究[J].中国酿造,2010(10):151-153.

[2]王琪,陶河清.车前草药理作用的研究进展[J].世界最新医学信息文摘,2017,17(A2):72+75.