荷叶提取物的微生物抑制作用

背景及概述^[1][2]

荷叶为睡莲科植物莲的干燥叶， 主产于湖南、 湖北、浙江、江苏等地。在过去中国传统医学认为荷叶具有清热解暑、升发清阳、 凉血止血等功效， 常用于治疗暑热烦渴、暑湿泄泻、便血便漏、脾虚泄泻以及痈、疼痛和湿疹等。荷叶在中国民间也有被用来治疗口腔炎症、红肿和口臭等不适。荷叶在中国资源丰富，少见毒副作用，被列为“按传统既是食品又是中药材物质目录”。荷叶中含生物碱、黄酮类、挥发油、机酸类、β-谷甾醇、胡萝卜苷、β-胡萝卜素、鞣质、皂类、甾体、维生素C、多糖等，其中生物碱、黄酮类和挥发油等为主要成分。荷叶具有调血脂、减肥、抗氧化、抗衰老、抗动脉粥样硬化、保护心血管、抑菌、抗病毒、抗炎、治疗妊娠糖尿病、保肝、保肾、调节免疫、抗焦虑以及抗癌等功效，在抗微生物方面有突出的疗效。

鉴别^[2]

薄层鉴别

对照品溶液的制备: 取荷叶碱对照品，加甲醇制成每1mL 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。对照药材溶液的制备: 取葛根对照药材0.5 g，加甲醇10mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5mL 使溶解，作为对照药材溶液。

供试品溶液的制备: 取本品 0.5 g，加甲醇 10 mL，超声30min，滤过，滤液作为供试品溶液。照薄层色谱法( 中国药典 2015年版一部附录ⅥB) 试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板( 青岛海洋化工厂) 上，以二氯甲烷－ 乙酸乙酯－甲醇－水( 3∶4∶2∶1) 下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液作为显色剂。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

微生物抑制作用^[1]

1 荷叶提取物的抗菌作用

1.1 抑制口腔致病菌

有研究发现荷叶相对其他常见中草药抑制龋病及牙周病相关的细菌具有更好的效能以及更低的成本。

1. 1. 1 抑制牙周致病菌: 牙周病通常被视为一种慢性炎症性疾病，多种细菌在疾病形成中发挥作用。这些细菌较常见的包括伴放线放线杆菌、 黏性放线菌、 牙龈卟啉单胞菌、 具核梭杆菌、 内氏放线菌等。研究发现荷叶中多种成分能不同程度地抑制牙周常见致病菌。首先荷叶醇类提取物对于牙周致病菌具有较稳定的抑制作用。荷叶醇类提取物黄酮中的槲皮素、 金丝桃苷、 紫云英苷能有效抑制上述 5 种常见牙周致病菌，确定其能有效治疗牙龈炎、 牙周炎等口腔疾病。且荷叶首次被应用于口腔卫生保健并成为一项国家专利。

另通过 MTT 比色分析法即利用活细胞内的呼吸酶将染料 MTT 还原成甲月赞颗料，再以酸化异丙醇溶解甲月赞颗料所得颜色深浅， 反映试验菌数量及代谢活跃程度， 发现浓度越高的荷叶乙醇提取物对牙周常见致病菌抑制作用越强，猜测荷叶中抗有丝分裂的碱性成分是抑菌活性的主要成分。荷叶正丁醇、40%乙醇提取物等对上述5种可疑牙周致病菌均有明显的抗菌活性，其抑菌效能较茶色素更强。并通过实验表明含其中抑菌活性最强成分的牙膏比两种市售中华中草药牙膏(中药) 及黄柏牙膏(黄柏) 具更高的抗菌活性。后该成分经光谱分析确定为黄酮类化合物的槲皮素。目前许多研究表明可从荷叶中分离出大量槲皮素或槲皮素-3-O-糖苷的黄酮类成分。

1. 1. 2 抑制龋齿致病菌: 变形链球菌是口腔主要致龋菌。有研究通过纸片扩散法表明 4 种植物提取物中抗变形链球菌能力最强的为荷叶和石榴果皮水提取物。观音莲明碱除抑制口腔常见牙周致病菌外，还能抑制变形链球菌， 可见荷叶水提取物及观音莲明碱均具有良好的防龋前景。

综上，荷叶醇类及水提取物在抑制牙周及龋齿致病菌方面均具有良好的应用前景，然除槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷、观音莲明碱等成分已明确，余成分尚未知。且荷叶各提取物的抑菌机制在各研究中甚少阐明，因而对于荷叶抑菌具体成分及抑菌机制仍须进一步研究。

1.2 抑制创口感染相关菌

长期以来，由细菌感染所致的死亡率非极高， 加上抗生素的滥用使得病原菌耐药性问题日益严峻， 筛选自植物如荷叶的化合物是无数治疗药品的巨大来源。荷叶甲醇提取物通过琼脂扩散法发现具备有效的抗细菌和抗真菌活性。

1.3 食品防腐方面

荷叶因其良好的抑菌活性，不仅能有效预防口腔及创口感染，近年来其在食品防腐方面也愈加受到研究者的关注。研究显示荷叶抗腐败菌的主要功能成分有生物碱、黄酮类、挥发油及多糖等。荷叶碱等生物碱类化合物，因具有强烈抗有丝分裂作用从而具有较强的抑菌作用，是荷叶中含量最高的成分之一。如从荷叶等中草药中提取出的 4 种异喹啉衍生物类生物碱， 经瑞典产八通道微量量热仪测定能有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等细菌的代谢，猜测生物碱结构与其抑菌活性有关。另通过不同提取方法得到的荷叶生物碱提取物， 均对食品常见腐败菌有不同程度的抑制作用。黄酮类化合物是许多药食两用植物中如荷叶的主要活性成分。由不同提取方法得到荷叶黄酮类提取物， 经证实对食品常见腐败菌均具有效的抑制作用，且抑菌活性较稳定，受环境如温度、pH 值影响较小。

2 荷叶抗病毒作用

关于荷叶提取物抗病毒研究，较早有柏田良树分离得到的两种类黄酮糖苷显示具有抗 HIV活性。另有学者分析了 18 种阿朴啡类生物碱抗脊髓灰质炎病毒的构效关系，肯定了阿朴啡类生物碱的抗病毒效能。从荷叶分离而来的(+) -1( R)-coclaurine、(-) -1( S) -norcoclaurine、quercetin 3-O-β-D-glucuronide，以及从荷叶及莲胚分离而来的苄基异喹啉类、阿朴啡和双苄基异喹啉类生物碱具备抗HIV 活性，抗 HIV 半数有效浓度 (EC50)均小于2μg /mL，治疗指数( TI) 均大于6. 5μg /mL。这对于控制死亡率高、传播性强但仍无法有效治愈的AIDS 来说具有重要意义。荷叶总生物碱还具明显抗鸡新城疫病毒( NDV) 作用，且其抗病毒作用在安全剂量范围内随着药物浓度增加而递增。虽然荷叶提取物在抗病毒方面具有良好的效能，但荷叶抗病毒研究及其实际应用至今相对较少。

3 荷叶抗真菌作用

荷叶提取物除了具备有效的抗细菌及抗病毒作用，其在抗真菌方面同样有肯定的抑制效能，然相比于其抑菌作用较弱。有研究表明，白色念珠菌具有与变形链球菌类似的粘附能力，可能与牙周病存在一定的联系，且白色念珠菌在多种口腔黏膜病中发挥了不可忽视的作用。有研究发现提取并纯化自荷叶的一种生物碱观音莲明碱以及(R)-莲碱均能够有效抑制白色念珠菌，然而荷叶水提取物对白色念珠菌未见明显抑制作用，推测荷叶乙醇类提取物较水提取物能更有效抑制白色念珠菌。

主要参考资料

[1]潘利君,陈晖,江闻,汪飒,张杰.荷叶提取物抑制微生物的研究进展及其应用[J].中药材,2017,40(10):2479-2482.

[2]黄媛,高广慧.荷叶提取物的质量标准研究[J].山东化工,2016,45(09):66-69.