丁酰胆碱酯酶单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

丁酰胆碱酯酶单克隆抗体是一个可以特异性结合丁酰胆碱酯酶的单克隆抗体，主要用于检测丁酰胆碱酯酶的免疫学实验。

丁酰胆碱酯酶是由肝脏合成的一种非特异性酯酶，由于该酶在肝脏中合成后立即释放到血浆中，因此血清中BuChE活性是测定肝细胞蛋白质合成功能的灵敏指标。

胆碱酯酶（choline esterase，CHE）的作用是水解乙酰胆碱。胆碱酯酶分为两种乙酰胆碱酯酶（AChE，又称真性胆碱酯酶）和丁酰胆碱酯酶（BuChE，又称假性胆碱酯酶）。真性胆碱酯酶存在于中枢神经系统灰质、交感神经节、运动终板、红细胞等处。

丁酰胆碱酯酶免疫组化

假性胆碱酯酶存在于中枢神经系统白质、血浆、肝、胰、肠系膜、子宫等处。乙酰胆碱为中枢及周边神经系统中常见的神经传导物质。当神经末梢受刺激引起兴奋时，乙酰胆碱由轴突末梢释出之后，会穿过突触间隙，和突触后神经元或运动终板的细胞膜上的受体结合，发挥神经-肌肉的兴奋传递作用。

随后，乙酰胆碱即被胆碱酯酶水解而失去作用。如果胆碱酯酶的作用被抑制，就会发生乙酰胆碱过剩而集聚的现象，引起胆碱能神经过度兴奋，类似有机磷中毒的表现。

应用^[4][5]

用于鸡血清丁酰胆碱酯酶分离纯化与农药敏感性研究

以鸡血清为研究对象，对鸡血清BChE进行分离纯化，并对其基本酶学性质进行了研究。进而以七种有机磷和六种氨基甲酸酯类农药为抑制剂，对比研究了鸡血清BChE和商品化的马血清BChE的农药敏感性。

研究结果如下：1.鸡血清BChE经DEAE Sephadex A-50离子交换和Sephacryl S-200分子筛层析后，比活力由0.0628μmol/min·mg提高到2.3689μmol/min·mg，纯化37.72倍，回收率为31.69%。纯化后的酶除去了大量杂蛋白。

2. 鸡血清BChE的Km为60.68μmol/L，碘化硫代丁酰胆碱对该酶无过量底物抑制效应，该酶最适反应pH为8.0，最适反应温度为35℃，对毒扁豆碱敏感性高，对盐酸多奈哌齐敏感性低。

3. 不同纯度的鸡血清BChE对农药的抑制率基本相同。

4. 通过测定鸡血清BChE和马血清BChE对七种有机磷农药的IC50值，可得以下结论：鸡血清BChE对七种有机磷农药的敏感性从强到弱依次为：速灭磷＞敌百虫＞敌敌畏＞磷胺＞久效磷＞甲拌磷≈对硫磷；鸡血清BChE对甲拌磷、对硫磷极不敏感。马血清BChE对七种有机磷农药的敏感性从强到弱依次为：速灭磷＞敌百虫＞磷胺＞敌敌畏＞甲拌磷＞久效磷＞对硫磷。

5.通过测定鸡血清BChE和马血清BChE对六种氨基甲酸酯类农药的IC50值，可得如下结论：鸡血清BChE对六种农药的敏感性从强到弱依次为：涕灭威＞灭多威＞速灭威＞克百威＞异丙威＞丁硫克百威；且鸡血清BChE对丁硫克百威极不敏感。

参考文献

[1]A novel,sensitive,reusable and low potential acetylcholinesterase biosensor for chlorpyrifos based on 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate/multiwalled carbon nanotubes gel[J].Lucian-Gabriel Zamfir,Lucian Rotariu,Camelia Bala.Biosensors and Bioelectronics.2011(8)

[2]Suitability of human butyrylcholinesterase as therapeutic marker and pseudo catalytic scavenger in organophosphate poisoning:A kinetic analysis[J].N.Aurbek,H.Thiermann,F.Eyer,P.Eyer,F.Worek.Toxicology.2009(3)

[3]B-type esterases in the snail Xeropicta derbentina:An enzymological analysis to evaluate their use as biomarkers of pesticide exposure[J].Environmental Pollution.2008(1)

[4]Amperometric biosensing of carbamate and organophosphate pesticides utilizing screen-printed tyrosinase-modified electrodes[J].Yaico D.Tanimoto de Albuquerque,Lucas Franco Ferreira.Analytica Chimica Acta.2007(2)

[5]李维.鸡血清丁酰胆碱酯酶分离纯化与农药敏感性研究[D].西华大学,2014.