钾依赖钠钙交换蛋白6抗体的应用

背景^[1-3]

钾依赖钠钙交换蛋白6抗体是一类可以特异性结合钾依赖钠钙交换蛋白6的多克隆抗体，主要用于钾依赖钠钙交换蛋白6的体外检测实验。

钾依赖钠钙交换蛋白是一个由938个氨基酸残基构成的、包含11个疏水性跨膜片段的蛋白质，是细胞膜上的一个逆向转运系统，也是一种双向离子转运体。

钾依赖钠钙交换蛋白有两种工作模式：前向型（forward mode）:将钠离子转入细胞内，将钙离子转出细胞。在心肌细胞，这种功能对于舒张期钙离子及时排出细胞很重要；反向型（reverse mode）:将钙离子转入细胞内，将钠离子转出细胞。在一些病理状态下，比如缺血再灌注，强心苷中毒时，可以导致反向钠钙交换体激活，造成细胞内钙超载。

钾依赖钠钙交换蛋白6免疫组化

在大多数组织细胞，钠钙交换体是以转入三个钠离子和排除一个钙离子的化学计量进行活动的。它的主要功能是利用钠泵活动建立的膜两侧钠离子浓度梯度势能，将细胞内的钙离子排出细胞，以维持细胞内低的游离钙离子浓度。例如，心肌细胞在兴奋-收缩偶联过程中流入细胞的钙离子，大多数是由钠钙交换体排出细胞的，少部分由肌膜上的钙泵排出细胞。如果用哇巴因抑制钠泵的活动，将减低钠离子的跨膜浓度梯度，从而减小钠钙交换的速率，造成细胞内钙离子浓度升高。

应用^[4][5]

用于钾依赖钠钙交换蛋白-6（SLC24A6）的基因克隆与蛋白表达研究

克隆和表达钾依赖钠钙交换蛋白-6（SLC24A6）基因,为进一步阐明其与胰岛素分泌的关系奠定基础。方法

:利用RT-PCR观察SLC24A6基因在胰岛素瘤和正常胰腺组织中的表达,并克隆SLC24A6基因全长,将SLC24A6基因构建到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌ROSSET菌（DE3）中诱导表达纯化;将SLC24A6基因构建到绿色荧光真核表达载体pEGFP-C3,利用共聚焦显微镜观察SLC24A6在小鼠胰岛素瘤β-TC3细胞中的定位。

结果:SLC24A6基因在胰岛素瘤组织表达明显高于正常胰腺;成功获得原核表达纯化蛋白,大小约80kD;重组载体pEGFP-C3-SLC24A6转染后,定位于小鼠胰岛素瘤β-TC3细胞膜上。

结论:SLC24A6可能与胰岛素分泌有关,SLC24A6全长原核表达为进一步研究SLC24A6的生物学功能和蛋白质晶体结构奠定了基础,SLC24A6在胰岛素瘤细胞的定位为进一步阐明其与胰岛素分泌的关系提供了理论依据。

参考文献

[1]Molecular cloning of a novel sodium/calcium exchanger-NCEx from human insulinoma tissue.Wang XC,Hu RM.Diabetologia.2003

[2]Molecular cloning of a sixth member of the K+-dependent Na+/Ca2+exchanger gene family,NCKX6.Cai X,Lytton J.Journal of Biological Chemistry.2004

[3]Molecular cloning and functional expression of the cardiac sarcolemmal Na+-Ca2+exchanger.Nicoll DA,Longoni S,Philipson KD.Science.1990

[4]Gene expression profi-ling in human insulinoma tissue:genes involved in the in-sulin secretion pathway and cloning of novel full-length cDNAs.Wang XC,Xu SY,Wu XY,et al.Endocrine Related Cancer.2004

[5]刘瑜,王宣春,陈凤玲,牟波,胡仁明.钾依赖钠钙交换蛋白-6(SLC24A6)的基因克隆与蛋白表达[J].中国病理生理杂志,2006(06):1041-1044.