人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量检测人IL-6。

实验原理：用抗人IL-6抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-6与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-6抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-6抗体与结合在包被抗体上的人IL-6结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人IL-6的浓度。

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒

白细胞介素6（IL-6）是一种同时具备促炎性和抗炎性的细胞因子。在人类中，它由IL-6基因编码。在感染期间和受到外伤后，尤其是烧伤或其它组织损伤导致的炎症，IL-6会由T细胞和巨噬细胞分泌，促进免疫应答。

研究表明，小鼠抵抗肺炎链球菌感染时需要IL-6的参与，说明IL-6在抵抗感染中发挥作用。IL-6在很多疾病如糖尿病、动脉粥样硬化、抑郁症、阿尔茨海默氏病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、前列腺癌、白塞氏病和类风湿性关节炎等中可促进炎性和自身免疫疾病进程。晚期/转移性癌症患者的血液中具有较高水平的IL-6。

应用^[4][5]

用于白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）在腹主动脉瘤壁和血清中的表达及意义研究

进行两方面的问题探究:一是IL-6和RANTES与腹主动脉瘤的相关性分析;二是探讨IL-6和RANTES影响腹主动脉瘤形成的机制。

分组:1.分析40例腹主动脉瘤患者的临床资料,加入正常对照组40例,根据直径将患者分为3组:正常对照组,小腹主动脉瘤患者组（3cm<腹主动脉瘤径<5cm）、大腹主动脉瘤患者组（腹主动脉瘤径≥5cm）,并收集其血液样本。

2. 收集正常腹主动脉壁组织标本及腹主动脉瘤壁组织标本各3例。

3. 培养腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞RAW264.7,分为3组:A组:RAW264.7组,只加完全培养基;B组:RAW264.7+IL-6组:加入含有10ng/ml IL-6的完全培养基;C组:RAW264.7+IL-6+RANTES siRNA组:转染RANTES siRNA,用含有10ng/ml IL-6的完全培养基培养。

实验主要分为以下几部分:1.ELISA法检测腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES的水平;

2. 免疫组化法检测IL-6和RANTES在腹主动脉瘤壁的表达情况;

3. qRT-PCR法检测转染siRNA RANTE的转染效率;

4. CCK-8法检测IL-6和RANTES对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞增殖的影响;

5. Transwell法检测IL-6和RANTES对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞迁移的影响;

6. qRT-PCR检测腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6以及siRNA RANTES处理后RANTES mRNA水平的表达;

7. IL-6和RANTES对STAT3及其磷酸化水平的影响。

结果:1.腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES水平均高于健康者,而腹主动脉瘤组间无差异。

2. 通过免疫组化染色法检测显示IL-6和RANTES在腹主动脉瘤壁的表达明显高于正常腹主动脉壁。

3. siRNA RANTE3的转染效率最高,可有效抑制RANTES的表达利用脂质体2000转染siRNA RANTES入RAW264.7细胞中,qRT-PCR检测分别用三个不同序列合成的siRNA RANTES质粒转染细胞的转染效率,结果表明,三种质粒均降低了RANTES的mRNA水平的表达,且RANTES siRNA3的抑制程度最高。

4.IL-6和RANTES促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的增殖随着时间增长,IL-6作用下RAW264.7细胞的活性增高,与RAW264.7对照组比较,差异有统计学意义,表明IL-6对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞增殖的促进作用不断增强。而在转染RANTES siRNA细胞中,与IL-6组比较,差异有统计学意义,表明IL-6对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的细胞增殖的促进作用被抑制。

参考文献

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[3]Aortic Wall Inflammation Predicts Abdominal Aortic Aneurysm Expansion,Rupture,and Need for Surgical Repair[J].Circulation.2017(9)

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[5]李林.白介素6（IL-6）和T细胞激活分泌调节因子（RANTES）在腹主动脉瘤壁和血清中的表达及意义[D].青岛大学,2018.