猪髓过氧化物酶(MPO)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

猪髓过氧化物酶(MPO)ELISA KIT用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中猪髓过氧化物酶(MPO)抗体水平。

实验原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入猪髓过氧化物酶(MPO)抗体抗原、生物素化的猪髓过氧化物酶(MPO)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪髓过氧化物酶(MPO)抗体呈正相关。

猪髓过氧化物酶(MPO)ELISA KIT

操作步骤：

1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10分钟.

7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

应用^[4][5]

用于血浆MPO、DKK-1、YKL-40及SP-D与急性冠脉综合征的关系研究

髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）、Dickkopf-1（DKK-1）、YKL-40、肺表面活性物质相关蛋白D（Pulmonary Surfactant-associated protein D,SP-D）与动脉粥样硬化斑块的形成和炎症反应有关,但其在急性冠脉综合征患者血浆中表达水平及诊断价值还有待进一步研究。

血浆中髓过氧化物酶、Dickkopf-1、YKL-40、肺表面活性物质相关蛋白D的检测急性冠脉综合征患者于入院后行再灌注治疗前抽取静脉血5ml（EDTA抗凝）,其中心肌梗死患者于住院治疗7日后再次抽取清晨空腹血5m1作为短期治疗后对照。

对照组于查体当天抽取清晨空腹血5m1。采血30min内将标本在4℃。3000rpm条件下离心10分钟,分离上层血浆,分装冻存入-80℃冰箱。使用ELISA试剂盒（美国R&D systems,Inc.）检测标本中髓过氧化物酶、Dickkopf-1、YKL-40、肺表面活性物质相关蛋白D的浓度。

统计学分析使用统计学软件SPSS17.0分析数据。正态性检验用单样本K-S检验；不符合正态分布的资料使用对数转换后使其符合正态分布；两样本均数的比较用独立样本T检验；两组配对样本的均数比较用配对样本T检验；多组均数的两两比较用ANOVA;相关性分析用双变量相关分析；用ROC曲线分析其诊断价值;均以P<0.05为有显著性差异的标准。

参考文献

[1]Association between the surfactant protein D（SFTPD）gene and subclinical carotid artery atherosclerosis[J].Grith L.Sorensen,Else Marie Bladbjerg,Rudi Steffensen,Qihua Tan,Jens Madsen,Thomas Drivsholm,Uffe Holmskov.Atherosclerosis.2015

[2]Complementary,Alternative,and Putative Non-troponin Biomarkers of Acute Coronary Syndrome:New Resources for Future Risk Assessment Calculators[J].Ronald W.Millard,Michael Tranter.Revista Espa?ola de Cardiología（English Edition）.2013

[3]Immune Effector Mechanisms Implicated in Atherosclerosis:From Mice to Humans[J].Peter Libby,Andrew H.Lichtman,G?ran K.Hansson.Immunity.2013(6)

[4]Laboratory diagnostics of myocardial infarction–troponins and beyond[J].Karl J.Lackner.Clinical Chemistry and Laboratory Medicine.2013(1)

[5]杨帆.血浆MPO、DKK-1、YKL-40及SP-D与急性冠脉综合征的关系[D].山东大学,2016.